【摘 要】
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目的:通过研究可注射富血小板纤维蛋白（injectable platelet rich fibrin,i-PRF）材料的物理与生物学特性,不同浓度、不同组分i-PRF对人毛乳头细胞（human dermal papilla cell,h DPC）的增殖、迁移、诱导能力影响,探究i-PRF治疗脱发的可能机制,为临床脱发治疗提供理论依据。方法:1.采集人外周静脉血,在60 g离心力下离心3 min制备
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目的:通过研究可注射富血小板纤维蛋白（injectable platelet rich fibrin,i-PRF）材料的物理与生物学特性,不同浓度、不同组分i-PRF对人毛乳头细胞（human dermal papilla cell,h DPC）的增殖、迁移、诱导能力影响,探究i-PRF治疗脱发的可能机制,为临床脱发治疗提供理论依据。方法:1.采集人外周静脉血,在60 g离心力下离心3 min制备i-PRF。分别制备不同浓度、不同组分i-PRF及相应条件培养基。其中不同组分i-PRF包括红色i-PRF（Red i-PRF,R-PRF）与黄色i-PRF（Yellow i-PRF,Y-PRF）。2.扫描电子显微镜观察i-PRF的超微结构。人血球计数板计数i-PRF中白细胞与血小板数目。分别在完全凝固后1小时,1天,3天,5天,7天,10天及14天使用ELISA法检测i-PRF中血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF）、转化生长因子（Transforming Growth Factor-β,TGF-β）、表皮生长因子（Epidermal Growth Factor,EGF）、胰岛素样生长因子（Insulin-like Growth Factors-1,IGF-1）浓度。3.显微解剖法分离培养原代hDPC。倒置显微镜观察细胞形态学,碱性磷酸酶染色法检测细胞内碱性磷酸酶活性,免疫荧光法检测细胞内α-SMA、Versican及Cytokeratin 8表达。4.Live/Dead染色实验检测i-PRF生物相容性。CCK-8细胞增殖实验及Ed U细胞增殖实验检测i-PRF对h DPC增殖能力影响。Trans-Well小室实验检测i-PRF对h DPC细胞迁移能力影响。碱性磷酸酶染色实验检测i-PRF对h DPC碱性磷酸酶活性影响。Real-Time PCR检测i-PRF对h DPC内BMP信号通路基因、FGF信号通路基因、WNT信号通路基因、诱导能力标志基因等毛发再生相关基因表达的影响。结果:1.i-PRF具有复杂的三维结构,镜下可见纤维蛋白凝集成束并相互交织,形成主干与分支交互连接的支架结构,平均孔隙直径范围10μm-30μm。R-PRF中白细胞及血小板计数比Y-PRF高2-3倍。在1小时、1天,3天,5天,7天,10天及14天时,R-PRF及Y-PRF条件培养基中均检测到高浓度VEGF、TGF-β、EGF、IGF-1,其中R-PRF条件培养基中生长因子浓度高于Y-PRF。2.不同浓度i-PRF组内h DPC活细胞比例均大于95%,且各组间无统计学差异。在1%-30%的浓度区间内,h DPC细胞增殖能力与i-PRF浓度呈负相关,h DPC细胞迁移及毛发诱导能力与i-PRF浓度呈正相关。低浓度i-PRF有利于h DPC增殖,高浓度i-PRF有利于h DPC细胞迁移及毛发诱导,其中20%浓度i-PRF表现出最佳的促迁移、促碱性磷酸酶活性、及促毛发诱导相关基因表达的作用。3.不同组分i-PRF各组内h DPC活细胞比例均大于95%,且各组间无统计学差异。R-PRF在h DPC细胞增殖、细胞迁移、及毛发诱导能力上均表现出优于Y-PRF的作用效果。结论:1.i-PRF是一种理想的生物材料,具有复杂的纤维蛋白三维支架结构及优异的生物组织相容性,可持续释放多种生长因子至少14天。R-PRF生长因子释放能力优于Y-PRF。2.i-PRF对h DPC的生物学作用与浓度密切相关,低浓度i-PRF有利于细胞体外扩增,高浓度i-PRF有利于毛发再生。3.不同组分i-PRF对hDPC的生物学影响不同。对比Y-PRF,R-PRF能更有效地促进h DPC细胞增殖、细胞迁移及毛发诱导,其对h DPC的作用效果优于Y-PRF。
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