【摘 要】
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目的:本实验通过激光共聚焦显微镜(CLSM)观察厚朴酚对体外变形链球菌生物膜的作用效果,并初步了解厚朴酚对变形链球菌生物膜的产酸、耐酸、胞外多糖形成及生物膜形成能力等相关
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目的:本实验通过激光共聚焦显微镜(CLSM)观察厚朴酚对体外变形链球菌生物膜的作用效果,并初步了解厚朴酚对变形链球菌生物膜的产酸、耐酸、胞外多糖形成及生物膜形成能力等相关致龋毒力因子的转录表达的影响,为进一步研究厚朴酚防龋的药理作用机制奠定基础。方法:首先在盖玻片上建立变形链球菌生物膜体外模型,经不同药物浓度作用后,分别加入吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色,在激光共聚焦显微镜观察并进行红绿荧光定量分析;根据GenBank基因库查询ffh、gtfD、pdp等基因序列并设计引物,RT-PCR方法测定变形链球菌生物膜致龋毒力因子ffh、gtfD和pdp基因片段受不同药物浓度作用后基因表达水平的变化。结果:CLSM观察厚朴酚作用于已形成的24h细菌生物膜后,实验组绿色荧光面积随着药物浓度的增加而减少,与对照组相比各药物浓度均明显降低了细菌生物膜的生长活性,膜内活菌比例明显下降;通过电泳凝胶成像系统检测分析,在梯度药物浓度作用并保证细菌模板量一致的情况下,毒力因子ffh、gtfD、pdp等的基因片段在电泳检测条带上的亮度依次变暗甚至消失,说明厚朴酚在一定浓度下能够使变形链球菌生物膜毒力因子的基因表达量呈明显下降趋势。结论:厚朴酚对变形链球菌生物膜的生长活性有良好的抑制作用,并且能抑制其致龋毒力因子ffh、gtfD、pdp等基因片段的mRNA的转录表达,由此可以推断厚朴酚对变形链球菌生物膜生长的影响是由于其抑制或干扰了某些基因片段的转录和表达,从而导致生物膜结构受到破坏。
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