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目的:构建稳定表达人血管内皮细胞生长因子 VEGF-165的人骨髓间充质干细胞株(hMSCs)并检测经基因转染后外源基因的表达,为进一步研究利用hVEGF基因转染的hMSCs 在心肌梗塞动物模型中作用打下基础。
方法:首先是hVEGF165 和稳定转染质粒pcPGK- hVEGF 165的构建,利用脂质体介导转染hMSCs,然后进行阳性细胞克隆筛选,用RT-PCR、 Real time PCR、Western Blot、 ELISA 的方法检测 hVEGF165在hMSCs中的表达。
结果:扩增VEGF后成功构建质粒 pcPGK-hVEGF165,并利用脂质体顺利转染进hMSCs,并筛选稳定表达的细胞株。RT-PCR、 Real time PCR检测结果显示在MSCs(VEGF165)表达的VEGF165信使RNA明显高于对照及未转染的hMSCs,而Western Blot、ELISA检测结果显示hMSCs(VEGF165)细胞及培养上清中的VEGF蛋白明显高于对照及未转染的hMSCs。
结论:采用脂质体介导基因转移技术可将hVEGF165顺利转染hMSCs中,并获得稳定表达VEGF165的细胞株,有望将干细胞移植和基因治疗结合治疗缺血性心脏病。