刺槐种子凝集素的分离纯化和部分性质研究

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关于植物凝集素分离纯化和性质测定的研究很多,但是针对刺槐种子凝集素国内外研究甚少。本文以刺槐种子为材料,从中分离得到刺槐种子凝集素,并对其部分生物学性质及其对一些林木病原真菌的抑制作用做了初步研究,为今后的工作打下了前期基础。 刺槐(Robinia pseudoacacia L.)种子经粉碎、浸取、硫酸铵分段盐析、透析除盐、Sepharose 4B离子交换和Sephadex G-150分子筛层析,得到两种刺槐种子凝集素RPsA Ⅰ(Robinia pseudoacacia seed agglutinin Ⅰ,RPsA Ⅰ)和RPsA Ⅱ(Robinia pseudoacacia seed agglutinin Ⅱ,RPsA Ⅱ)。纯化的凝集素在PAGE中显示单一色带,在SDS-PAGE中也显示一条肽链,以分子量Mr/10000对Rf(迁移率)绘制标准曲线,可求得RPsA Ⅰ和RPsA Ⅱ的亚基分子量分别为38 000和31 000,推测它们可能都是由4个相同的亚基组成。 对RPsA Ⅰ和RPsA Ⅱ进行了部分生物学性质测定。兔血球凝血活性的测定表明,RPsA Ⅰ和RPsAⅡ发生凝集反应的最低浓度分别为7.80 μg/ml和15.60 μg/ml;糖抑制实验结果表明,RPsA Ⅰ和RPsA Ⅱ的凝血活性都可受L-阿拉伯糖、D-果糖、D-半乳糖、麦芽糖的抑制。对热的稳定性实验结果表明,RPsA Ⅰ和RPsA Ⅱ的凝血活性低于45℃可保持稳定,高于60℃活性基本消失。pH对凝集活力的影响实验结果显示,RPsA Ⅰ和RPsA Ⅱ发生凝集反应的适宜pH范围分别为5-9.5和5-9。 针对刺槐凝集素对一些林木病原真菌的抗性作了初步研究。在所选用的8种林木病原真菌中,RPsA Ⅰ对其中的三种具有生长抑制,并且对Dothiorella gregaria Sacc.的抑制效果最好。平板抑菌实验结果表明,与对照相比,RPsA Ⅰ可明显地抑制Dothiorella gregaria Sacc.,Melanconium.oblongum Berk.,Cryphonectria parasitica(Murr.)Barr.的生长;用不同浓度的RPsA Ⅰ溶液对病原菌进行平板抑菌实验,抑制效果随凝集素浓度的升高而逐渐显著,抑菌圈直径逐渐扩大。对病原菌菌丝体生长的抑制实验结果显示,受到RPsA Ⅰ抑制作用的菌丝体生长缓慢,形态出现异常。
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