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研究背景：前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）是花生四烯酸经过环加氧酶-2（cyclooxygenase2，COX-2）催化的代谢产物，能够显著促进多种肿瘤的增殖、侵袭和转移，在肝癌的发生发展中发挥着重要的调控作用。PGE2主要通过四种细胞膜上的G蛋白偶联受体发挥作用（EP1，EP2，EP3和EP4）。关于EP1，EP2和EP4三种受体在肿瘤细胞中介导的信号转导通路的报道相对比较多，而对EP3受体与肿瘤发病机制的研究关注较少，EP3受体与肝癌的发病机制的关系也未见报道。EP3受体比较复杂，它的mRNA有多种可变剪接体，可以形成多种受体亚型，因此给其功能的研究也增加了一定的难度。而不同的EP3受体亚型根据其胞浆域C末端氨基酸序列的差异可与不同的G蛋白偶联，进行复杂的信号转导。肝癌细胞表达的EP3受体亚型种类不明，各亚型调控肝癌细胞生长的机制也不清楚，而我们的实验结果表明PGE2可以通过EP3受体促进肝癌细胞的生长，但其调控机制尚不清楚。本研究拟通过EP3受体激动、过表达转染、信号转导通路靶点干预、Real-timePCR、质谱分析与二维电泳等方法，研究肝癌细胞中EP3受体亚型表达及其与肝癌细胞生长的关系。有关这方面的研究工作国内外尚未见报道。本研究的结果有助于人们更好地认识PGE2促进肿瘤细胞生长的机制，并且对筛选新的抗肿瘤靶点具有重要的理论意义和实用价值。研究目的：1.明确PGE2通过EP3受体对肝癌细胞生长的调控作用。2.明确肝癌细胞中EP3受体剪接体亚型的表达情况。3.明确EP3激动后CCLP1细胞蛋白表达谱的变化。4.明确EP3受体与G蛋白偶联情况及可能的信号通路。研究方法：1.常规方法培养肝细胞癌HUH-7、 Hep3B、 HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞。2.用Real-Time PCR实验检测肝癌细胞EP3受体剪接体亚型的表达类型。3.用WST实验检测EP3受体激动剂Sulprostone对肝癌细胞生长的影响。4.二维电泳、质谱分析EP3受体激动后，下游蛋白水平的变化。5.用WST实验检测EP3受体激动剂Sulprostone、Gs通路的腺苷酸环化酶AC抑制剂SQ22536和PKA抑制剂H89对EP3-4稳定表达细胞系CCLP1细胞及空载细胞生长的影响。6.用EP3受体激动剂Sulprostone、腺苷酸环化酶AC抑制剂SQ22536和PKA抑制剂H89处理EP3-4稳定表达细胞系CCLP1细胞及空载细胞，Western blot实验检测靶蛋白FBP1的水平。研究结果：1.以DMSO为对照，分别用1μM、5μM、10μM EP3受体激动剂Sulprostone处理CCLP1细胞24h后，采用WST实验检测细胞生长情况，结果显示细胞生长率从对照组的100%增加至111.53%、119.49%、131.46%（P<0.01）。2. Real-Time PCR实验检测肝癌细胞，结果表明肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4，EP3-5，EP3-6和EP3-7四种剪接体亚型。3.给予CCLP1细胞10μM Sulprostone处理24h后,采用二维电泳和质谱实验对细胞蛋白水平的变化进行分析。结果发现促进细胞增殖侵袭、细胞代谢的蛋白水平升高；相反可以抑制细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白的表达。4.给予EP3-4稳定表达及空载的CCLP1细胞10μM EP3受体激动剂Sulprostone、50μM腺苷酸环化酶AC抑制剂SQ22536和10μM PKA抑制剂H89处理，用WST实验检测细胞生长情况。结果表明，EP3-4稳定表达细胞系CCLP1细胞“Sulprostone”处理组和对照组相比，细胞生长率从对照组的100%增加至166.35%（P<0.01）；“Sulprostone+H89”处理组和“Sulprostone”处理组相比，细胞生长率从166.35%降至86.81%（P<0.05）；“Sulprostone+SQ22536”处理组和“Sulprostone”处理组相比，细胞生长率从166.35%降至81.34%（P<0.05），空载细胞未发生明显变化。5.以DMSO组为对照，用10μM EP3受体激动剂Sulprostone、50μM腺苷酸环化酶AC抑制剂SQ22536和10μM PKA抑制剂H89处理EP3-4稳定表达细胞系CCLP1细胞及空载细胞，EP3-4稳定表达细胞系CCLP1细胞“Sulprostone”处理组的FBP1蛋白水平是对照组的1.82倍（P<0.05），“Sulprostone+H89”和“Sulprostone+SQ22536”处理组的FBP1蛋白水平与“Sulprostone”处理组相比，分别下降至105.56%和96.46%（P<0.05）；空载细胞未发生明显变化。H89、SQ22536可抑制Sulprostone上调CCLP1-pcDNA-EP3-4稳定表达细胞的FBP1蛋白水平。研究结论：1.PGE2可通过EP3受体促进肝癌细胞生长。2.肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4，EP3-5，EP3-6和EP3-7四种剪接体亚型。3.EP3受体激动后使CCLP1细胞中促进细胞增殖侵袭、细胞代谢相关的蛋白水平升高；抑制细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白的表达下降，从而促进CCLP1细胞的增殖。4.肝癌细胞中EP3-4亚型受体与Gs蛋白偶联，可能通过EP3-4-Gs-cAMP-PKA信号通路发挥促进肝癌细胞生长的作用。