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目的：本实验旨在研究细菌内毒素(LPS)介导的肺巨噬细胞核转录因子NF-κB激活及其在细胞凋亡中的作用和机制，探讨蛋白激酶C(PKC)在内毒素激活NF-κB中的作用及地位。方法：分离、纯化及培养大鼠肺巨噬细胞；以不同浓度的LPS(0μg/ml，0.01μg/ml，0.1μg/ml，1μg/ml，10μg/ml)和不同作用时间(0min，5min，15min，30min，60min，120min)分别刺激小室培养的细胞单层，观察NF-κB的核内浓度及NO合成量的动态变化，选择LPS的最佳用量和作用时间；然后分成四组实验，设正常对照组，LPS处理组，特异性PKC抑制剂(Cal C)阻断组，NF-κB抑制剂(PDTC)阻断组；收集培养的单层细胞及培养液；采用夹心ELISA法定量测定细胞核提取物中的NF-κB水平；免疫组化法检测NF-κB的核内移位变化；硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量；吖啶橙染色观察凋亡细胞的形态学变化，凋亡电泳实验检测细胞凋亡后基因组DNA的断裂情况。结果：1. 随着LPS用量的增加及作用时间的延长，细胞核内的NF-κB水平和培养液中NO含量逐渐增高。NF-κB核内浓度在LPS刺激浓度为10μg/ml，作用时间为60min时最高；NO含量则在用10μg/ml LPS作用48h时测值最高，二者与LPS之间存在时效及量效关系。2. 分组实验结果显示：①LPS作用后，肺巨噬细胞核内的NF-κB水平及培养上清液中NO含量均显著高于正常对照组的测值 (p<0.01)。Cal C和PDTC均能抑制NF-κB的核内浓度及NO含量水平，300nM的Cal C<WP=9>的抑制率为45.2%(对NF-κB)和73.8%(对NO)，而PDTC的抑制率则为63.8%(对NF-κB)和80.6%(对NO)，测值明显低于LPS处理组(p<0.05-0.01)；②NF-κB的核内移位(免疫组化)：正常对照组细胞的NF-κB主要位于胞浆中，仅少许细胞核内有NF-κB的存在；LPS处理后NF-κB由胞浆中转移到核内；对Cal C和PDTC阻断组的细胞而言，NF-κB位于核内或胞浆的细胞混杂存在，且后者细胞片中NF-κB位于胞浆的细胞比例较前者为多，但都明显少于正常对照组；③细胞凋亡的形态学改变：单用LPS作用后细胞发生凋亡表现为细胞变圆，胞浆浓缩甚至消失，核染色质边聚，呈半月形，核仁裂解，出现凋亡小体。随LPS作用时间延长，凋亡小体增多，甚至出现细胞死亡，溶解。Cal C和PDTC预处理均能减少LPS作用引起的细胞凋亡的发生数量；④凋亡电泳：在LPS作用组，细胞基因组DNA提取物的电泳泳道中可清晰看到特征性凋亡电泳图谱，呈现梯状DNA电泳条带，间距约在200bp左右(也称Ladder pattern现象)，CalC阻断组能观察到微弱的梯状DNA电泳条带，但与LPS作用组相比明显减弱。正常对照组和PDTC阻断组几乎不见凋亡电泳图谱。结论：1. LPS能诱导肺巨噬细胞核转录因子NF-κB的激活，进而引起NOS等基因转录与表达增加，最终导致巨噬细胞凋亡。2. 特异性PKC抑制剂 (Cal C) 的阻断实验结果提示PKC作为NF-κB活化的上游信使，参与了LPS激活NF-κB的信号传导通路。