光滑黄皮成分分离技术及其抗肿瘤活性评价

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芸香科(Rutaceae)黄皮属(Clausena)植物在全世界大约有30种,主要分布于东半球热带和亚热带地区,我国有10种及2个变种,产自西南部至台湾,主要分布于海南、广东、广西、云南、以及台湾等省区。黄皮属植物不仅作为热带水果资源,更是一种药用植物资源,具有悠久的民间药用历史,可用于感冒、胃痛、风湿性关节炎、解痉、抗肿瘤、保肝降脂等多种疾病。研究表明,黄皮属植物化学成分主要为生物碱类、香豆素类、萜类等多种类型化合物,现代药理学研究表明,黄皮属植物具有抗肿瘤、抗菌、抗疟以及抗HIV等多种活性。光滑黄皮(Clausena lenis)为芸香科黄皮属植物,主要分布于我国的海南、广西南部以及云南南部。有关光滑黄皮化学成分及其药理活性的研究相对较少。本课题组前期研究对光滑黄皮90%乙醇提取物进行了活性评价,结果表示具有显著的抗肿瘤活性,为了更合理的利用该植物资源,充分发挥它的药用价值,对其化学成分进行系统研究,不仅可为高效低毒的抗肿瘤新药的开发提供科学依据和物质基础,同时也为合理利用黄皮属药用植物资源奠定理论基础。将阴干的光滑黄皮茎粉碎,采用90%乙醇冷浸提取,减压浓缩,每周一次,提取三次,得总浸膏。再经正相硅胶柱层析、ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和半制备型HPLC等分离技术对浸膏中的化学成分进行系统的分离和纯化,利用理化性质以及NMR、UV、IR、MS等现代波谱学技术对分离得到的单体化合物进行结构鉴定。从光滑黄皮茎的90%乙醇提取物中分离鉴定得到56个单体化合物,分别鉴定为:clauselenin A(1)、clauselenin B(2)、clauselenin C(3)、6,8-diprenylumbelliferone(4)、gravelliferone(5)、swietenocoumarin I(6)、3-(11-DimethylaUyl)-6-(2-hydroxy-3-methyl-3-buten-1-yl)-7-methoxycoumarin(7)、chale pin(8)、angustifolin(9)、9-(2-hydroxy-3-methoxy-3-methylbutoxy)bergapten(10)、比克白芷素(11)、叔-O-甲基独活属醇(12)、牧草栓翅芹酮(13)、异栓翅芹烯醇(14)、独活属醇(15)、欧前胡素(16)、trans decursidinol(17)、(+)-decursinol(18)、花椒树皮素甲(19)、scataccanol(20)、isoangenomalin(21)、异紫花前胡内酯(22)、伞形花内酯(23)、3-formylcarbazole(24)、O-demethylmurrayanine(25)、九里香碱(26)、clausine Z(27)、clauszoline N(28)、clausine I(29)、2-Hydroxy-3-methyl-9H-carbazole(30)、glycozolidol(31)、methyl carbazole-3-carboxylate(32)、clausine E(33)、6-methoxycarbazole-3-carboxylate(34)、Claulansine I(35)、2-methoxy-1-(3-methyl-buten-1-yl)-9H-carbazole-3-carbaldehyde(36)、clausehainanine A(37)、claulansine B(38)、claulansine D(39)、mafaicheenamine A(40)、mafaicheenamine B(41)、4-O-methyl-1-methyl-quinolin-2-one(42)、N-metilatanina(43)、茵芋碱(44)、香草木宁(45)、syringaresinol(46)、(+)sesamin(47)、sesamolin(48)、异黑麦草内酯(49)、布卢姆醇B(50)、亚麻酸(51)、β-hydroxypropiovanillone(52)、丁香醛(53)、丁香酸(54)、对香豆酸(55)和香草酸(56)。其中化合物1-3为新化合物,化合物7、10、11、12、17、18、20、21、47、48、50、51、52、56均为首次从黄皮属植物中分离得到,除化合物25外,其他化合物均为首次从光滑黄皮中分离得到。采用改良MTT法对从光滑黄皮中分离鉴定的40个化合物进行了抗宫颈癌细胞(Hela)、人结肠癌细胞(HCT-116)、黑色素瘤细胞(B16F10)、人表皮癌细胞(A431)、人乳腺癌细胞(ZR-75-30)活性评价,研究发现13个具有显著细胞毒活性的单体化合物,IC50值为0.6317.22μM。研究为光滑黄皮的抗肿瘤活性研究提供了依据,同时,为寻找高效低毒的抗肿瘤活性药物提供了新的资源。
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