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目的:本课题运用高内涵、高通量技术对瑶族经典用药“老班药”中的麻骨钻提取物进行抗肿瘤药效筛选研究,明确麻骨钻提取物对结肠癌抑制作用;通过体内外实验,探讨麻骨钻提取物对结肠癌细胞增殖、克隆、划痕、迁移、凋亡等的影响;并初步进行麻骨钻提取物抗结肠癌活性部位的分离,为进一步探讨其抗结肠癌作用、分子机制以及有效成分奠定基础。方法:1.以瑶药麻骨钻提取物为研究对象,应用高内涵、高通量技术,对广西高发的6种肿瘤细胞株（结肠癌细胞SW480,乳腺癌细胞MDA-MB-231,肝癌细胞SMMC-7721,胃癌细胞SGC-7901,食管癌细胞Eca-109,肺鳞癌细胞SK-MES-1）进行抗肿瘤药效筛选。2.建立麻骨钻提取物抗结肠癌药效学评价方法,内容包括:细胞增殖,细胞克隆,细胞划痕,细胞迁移,细胞凋亡,细胞周期,协同增效抗肿瘤作用,斑马鱼抗血管新生,斑马鱼异种移植瘤增殖与转移。3.采用高效液相色谱法考察麻骨钻提取物的出峰及分离情况,并通过体外药效学实验,以抗结肠癌作用为导向,应用半制备高效液相色谱法对麻骨钻提取物进行分离。结果:1.高内涵、高通量技术及MTS实验研究结果显示,麻骨钻提取物对6种恶性肿瘤细胞的药效强弱依次为结肠癌细胞SW480,乳腺癌细胞MDA-MB-231,肝癌细胞SMMC-7721,胃癌细胞SGC-7901,食管癌细胞Eca-109,肺鳞癌细胞SK-MES-1。其中,麻骨钻对结肠癌细胞SW480药物干预24 h的半抑制浓度(IC50)为126.50μg/m L,48 h的IC50为78.25μg/m L,72 h的IC50为50.77μg/m L。在药物干预SW480细胞48 h,DAPI进行染色发现各给药浓度组的细胞形态发生明显的变化,细胞核收缩变圆,同时发现随着给药浓度的增高,细胞数量逐渐减少。我们考察了麻骨钻提取物对正常结肠上皮细胞NCM460的毒性作用,研究结果表明,其对NCM460细胞干预48 h无细胞毒性作用。2.克隆形成实验结果表明,麻骨钻能显著抑制结肠癌细胞SW480克隆形成,与空白对照组比较,10μg/m L浓度组克隆形成数目有明显差异（P＜0.05）;20、40、80、120μg/m L浓度组克隆形成数有非常显著性差异（P＜0.01）。3.划痕实验结果表明,麻骨钻提取物40μg/m L及80μg/m L浓度组在24、48 h的细胞划痕愈合程度与空白对照组相比明显减少;在24 h时麻骨钻提取物40μg/m L、80μg/m L浓度组的愈合率分别为16.40%、23.38%;在48 h时麻骨钻提取物40μg/m L、80μg/m L浓度组的愈合率分别为17.56%、14.79%;药物干预48 h时,与空白对照组相比,具有显著性统计学差异（P＜0.01）。4.高内涵进行活细胞迁移追踪,实验结果表明对每组4个复孔所有监测到的细胞数以及96T所有时间点进行分析,在麻骨钻提取物处理之后,随着药物浓度的增加,结肠癌细胞的运动轨迹有明显被抑制的现象。同时在对活细胞动态及行为的分析过程中,我们选择了3个时间点（6 h、12 h、24 h）对每组跟踪到活细胞的平均运动距离,运动速度进行分析比较,结果显示,在麻骨钻处理后,与空白对照组比较,各药物浓度组的平均运动距离,从时间点层次分析有缩短的现象,但组间比较无明显差异;各药物浓度组的运动速度,有显著减慢的趋势（P＜0.05）。5.流式细胞术检测细胞凋亡,结果发现随着药物浓度和作用时间的增加,麻骨钻提取物能诱导结肠癌细胞SW480凋亡,其中在72 h时高浓度组（120μg/m L）的细胞凋亡最为明显,与空白对照组相比,细胞凋亡率为63.70%（P＜0.01）。6.细胞周期实验结果表明,与空白对照组相比,G0/G1期细胞比例随药物作用时间延长、浓度的增加在逐渐减少;S期细胞比例基本不变;G2/M期的细胞比例随作用时间延长、浓度的增加在逐渐增多,细胞生长周期较明显地停滞在G2/M期,具有明显时间-浓度-效应依赖性。7.协同增效实验,我们探讨了麻骨钻提取物联合奥沙利铂及5-氟尿嘧啶分别对结肠癌细胞SW480增殖抑制的影响,我们采用MTS实验,结果表明,麻骨钻提取物联合奥沙利铂及5-氟尿嘧啶分别干预SW480细胞48 h,都具有显著的抑制作用,呈浓度-效应依赖性。当25μM奥沙利铂联合不同浓度的麻骨钻干预24、48、72 h及10μM 5-氟尿嘧啶联合不同浓度的麻骨钻干预24、48、72 h,随着药物作用时间增加,细胞增殖抑制作用越强,呈时间-效应依赖关系。8.利用斑马鱼模型探讨麻骨钻提取物对血管新生的影响,实验结果表明,在同一荧光强度下对斑马鱼幼鱼拍照,50μg/m L组、100μg/m L组、200μg/m L组、300μg/m L组斑马鱼幼鱼分别与空白对照组比较,斑马鱼幼鱼体节间血管数未见缺失或损伤情况,未见有抑制血管新生现象;PTK787阳性药物组与空白对照组比较（P＜0.01）,斑马鱼幼鱼体节间血管数有明显缺失情况。9.斑马鱼异种移植瘤模型探讨麻骨钻提取物对结肠癌细胞SW480体内增殖和转移的影响,实验结果表明,模型组在药物处理48 h后,荧光显微镜下可见红色肿瘤细胞在胚胎中的分布,较集中于卵黄部及卵黄延伸部,给药组与对照组比较,红色肿瘤灶面积减少（P＜0.01）,而且最大迁移距离也减小（P＜0.05）,呈浓度-效应依赖关系。当浓度为400μg/m L的药物浓度干预3 day,5 day后,分别将斑马鱼麻醉,在荧光立体显微镜下拍照观察,结果表明,药物干预斑马鱼后不同时间点荧光强度明显降低,肿瘤灶面积明显减少,呈时间-效应依赖关系。10.采用高效液相色谱仪对麻骨钻提取物进行全波长扫描,在检测波长为280 nm时,各色谱峰有较多的紫外吸收,各色谱峰之间的峰高和峰面积比例较均衡,整体分离度较好。因此,以280 nm为检测波长,运用半制备高效液相对麻骨钻馏分进行分离富集,按照出峰顺序,共收集13个馏分（F1-F13）。我们对收集到的13个馏分（F1-F13）进行体外MTS实验,药物干预48 h,结果表明,馏分F1、F2、F3、F4、F6对SW480细胞有明显增殖抑制作用,提示这5个馏分对SW480细胞为活性部位馏分。根据F1、F2、F3、F4、F6活性部位馏分色谱峰出峰情况,进一步对其进行分离,共收集17个馏分,即F1（F1-1,F1-2,F1-3,F1-4,F1-5）、F2（F2-1,F2-2,F2-3,F2-4）、F3（F3-1,F3-2,F3-3）、F4（F4-1,F4-2,F4-3）、F6（F6-1,F6-2）,对收集到的17个馏分进行体外MTS实验,药物干预48 h,结果表明,F4-1,F4-2,F4-3、F6-1,F6-2等馏分对结肠癌细胞增殖抑制效果不显著;F3-1,F3-2,F3-3等馏分仅在高浓度时（120μg/m L）对SW480细胞产生一定增殖抑制作用;而F1分离得到的F1-3,F1-4,F1-5以及F2分离得到的F2-2,F2-3,F2-4等馏分对SW480细胞具有显著抑制细胞增殖的作用,提示麻骨钻提取物主要活性部位成分集中在F1-3,F1-4,F1-5,F2-2,F2-3,F2-4等馏分。结论:1.麻骨钻提取物对结肠癌细胞SW480的增殖、克隆、划痕、迁移展现了较强的抑制作用,并与浓度和时间呈正相关依赖性。2.麻骨钻提取物高浓度（120μg/m L）可诱导结肠癌细胞SW480凋亡;麻骨钻提取物随作用时间延长、浓度的增加阻滞SW480细胞于G2/M期。3.麻骨钻提取物分别联合奥沙利铂及5-氟尿嘧啶能显著抑制结肠癌细胞SW480增殖,具有协同增效作用,呈浓度-时间-效应依赖关系。4.麻骨钻提取物可抑制结肠癌细胞SW480在斑马鱼幼鱼体内的增殖与转移,呈浓度-时间-效应依赖关系。5.体外药效学实验结果表明,麻骨钻抗结肠癌活性部位馏分为F1-3,F1-4,F1-5,F2-2,F2-3,F2-4。