特异性非共价相互作用的电泳法分析与应用

来源 :北京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xhg123456
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
非共价相互作用是指通过非共价键合力而形成的相互作用。特异性非共价相互作用体系在生命体中广泛存在,其研究和应用对于生命科学、临床医学等领域都具有重要意义。本论文选取了两个代表性的特异性非共价相互作用体系(即核酸适体与其靶分子体系、抗原与抗体体系)进行研究。   对于新兴的核酸适体与其靶分子体系,本论文建立了两种电泳方法对其相互作用进行了分析。   (1)化学发光标记的核酸适体作为探针用于毛细管电泳相互作用分析:本论文首次提出并实现了采用化学发光试剂(异硫氰酸基异鲁米诺)对核酸适体进行共价修饰,并采用高效液相色谱-质谱法表征和纯化,获得了较纯的化学发光单标记的核酸适体。本论文还搭建了毛细管电泳-化学发光装置,采用该实验装置研究了标记的核酸适体与其靶分子凝血酶的相互作用,三种计算方法所得实验结果与文献报道值一致,证明了方法的有效性。本论文所提出的标记方法简单、有效,易纯化,适用于任何核酸适体,是一种广普性、易推广的方法。本论文所搭建的装置简单、廉价,易于实现推广。再结合核酸适体靶分子的广泛性,本论文所建立的方法将可能在相互作用分析中得到广泛应用,为揭示生命过程奠定基础。   (2)连续性前沿分析芯片电泳法研究溶菌酶与其核酸适体的相互作用:本论文首次提出了利用连续性前沿分析芯片电泳法研究核酸适体与其靶分子的相互作用。为抑制核酸适体和蛋白质在芯片通道表面的吸附,本论文采用羟丙基纤维素对分离微通道内壁进行了涂层。结合激光诱导荧光检测,优化实验条件,获得核酸适体的LOD为10 nM(S/N=2),线性范围为20~500 nM(R2=0.996)。采用两种分析模式(即改变核酸适体浓度而固定溶菌酶浓度的模式、改变溶菌酶浓度而固定核酸适体浓度的模式),测定了溶菌酶与其核酸适体的解离常数,所得值与文献报道值相一致。实验发现X-倒数法中能进行分段拟合,结果显示:随核酸适体相对浓度的增加,溶菌酶与其核酸适体的亲和力而增加、结合位点数减少;推测该相互作用过程是首先以特异性相对较差的较弱亲和力结合,然后由于分子间竞争而致使两者的表观亲和力增强、相互作用特异性增加。本论文所提出的连续性前沿分析芯片电泳法有效、简单、快速,适用于任何核酸适体及其靶分子相互作用的研究。   对于经典的抗原与抗体体系,本论文利用其相互作用的高特异性,建立了基于微柱阵列芯片的新型免疫诊断方法。制作了微柱阵列芯片,优化了用其实现标准蛋白等电聚焦分离的条件(包括甘油浓度和琼脂糖浓度)。详细研究了甘油浓度对等电聚焦时间的影响和聚焦过程中的蒸发机制。为抑制蛋白质吸附,在微柱阵列区域表面采用了PDMA-AGE涂层。将过敏原性蛋白与非过敏原性蛋白在其上实现分离,结合免疫印迹,进行了病人血清中IgE的定性测定,实现了病人过敏症的诊断,是针对过敏原性蛋白的分子免疫诊断。实验结果与经典ELISA方法、聚丙烯酰胺凝胶电泳方法一致,证明了该免疫诊断方法的有效性。该免疫诊断方法相较常规经典方法,分析速度更快、样品消耗量更低(10μL病人血清),适用于过敏症的临床诊断,有望在临床上得到进一步应用。
其他文献
细胞凋亡的检测一直都是细胞生物学和肿瘤生物学研究领域的一个重要方向,免疫分析在临床诊断和生化分析中广泛应用。传统的分析与检测手段因其操作复杂、试剂消耗量大、费时费
配位聚合物因其丰富迷人的拓扑结构及在光学、磁学、多孔、催化等方面具有潜在的应用而吸引了广大化学工作者对其进行深入细致的研究工作。然而,想准确预测配位聚合物的组成和
纳米材料是纳米科学与技术的基础,它在信息存储、光电装置、催化和传感器等许多领域发挥着越来越重要的作用,其制备与应用一直是科学工作者的研究热点。   碳化硅(SiC)是一
学位
稀土纳米材料因其独特的光、电、磁和催化等性能,在纳米器件和功能材料等诸多领域具有重要的应用价值。大量研究表明,纳米材料的物理和化学性质与其尺寸、成分、形貌和晶型密切
光电化学过程是指光电化学活性物质因吸收光子而产生电荷传递的过程。光电化学活性物质受到光激发时会因发生电荷传递而形成光电流或者光电压。此时,若待测物与光电化学活性物
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
毛丹青在微博说了一件他在日本吃饭的趣事——  一个北京人到日本餐厅吃饭,因为从小吃熟食的习惯,拒绝了厨师推荐的最好吃的,七成熟的神户牛肉。但这位日本厨师还是不甘心,顿了顿,说出了两个理由:1.大家都是朋友,你相信我!2.神户牛肉真的好吃,你不吃对不起自己也对不起这头牛啊!  日本店员坚信神户牛肉最好吃、荞麦面上面不能放梅子,背后站着的是全体日本人的统一味觉系统。但在中国,仅东北,锅包肉就有两种口味
期刊
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
期刊
博物馆微环境中主要有害气体有CH3COOH、HCOOH、HCl、SOx、NOx、NH3等.采用常规的化学方法测定,均具有操作复杂、耗时长、污染大、成本高且难以同时测定多个污染物的缺点.离
淀粉回生是指糊化的淀粉分子链在温度降低时运动减弱,直链和支链分子的侧链趋向于平行排列,通过形成氢键,重新组合形成混合微晶束的过程。近年来淀粉在电化学研究领域的应用开始引起广泛关注,已有报道以玉米淀粉为碳源成功制备出锂离子电池Sn/C复合材料。在制备回生淀粉晶体时,湿热法作为一种温和的物理改性手段被广泛采用。但是对于不同来源的淀粉,需要对回生条件进行有针对性的详细研究,以提高制备效率,改善回生淀粉晶
学位