【摘 要】
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目的细粒棘球绦虫原头节和泡状棘球绦虫原头节分别与小鼠骨髓间充质干细胞在普通培养基和成骨诱导分化培养基共培养条件下,比较两种棘球绦虫原头节对小鼠骨髓间充质干细胞相关钙化因子的表达情况,初步探讨间充质干细胞参与棘球蚴钙化灶的形成及其机制。方法提取、培养细粒棘球绦虫原头节和泡状棘球绦虫原头节;提取、培养及鉴定小鼠骨髓MSCs;普通培养基条件下共培养骨髓间充质干细胞与两种棘球绦虫原头节;成骨诱导分化培养基
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目的细粒棘球绦虫原头节和泡状棘球绦虫原头节分别与小鼠骨髓间充质干细胞在普通培养基和成骨诱导分化培养基共培养条件下,比较两种棘球绦虫原头节对小鼠骨髓间充质干细胞相关钙化因子的表达情况,初步探讨间充质干细胞参与棘球蚴钙化灶的形成及其机制。方法提取、培养细粒棘球绦虫原头节和泡状棘球绦虫原头节;提取、培养及鉴定小鼠骨髓MSCs;普通培养基条件下共培养骨髓间充质干细胞与两种棘球绦虫原头节;成骨诱导分化培养基条件共培养骨髓间充质干细胞与两种棘球绦虫原头节;微量酶标法检测MSCs碱性磷酸酶活性;Western Blotting检测各组MSC中BMP2、RUNX2、P-Smad1/5/8和β-actin的表达;RT-qPCR评估钙化标记物BMP2、OCN、RUNX2的mRNA水平表达。结果ALP活性检测结果:普通培养条件:MSC+CE组和MSC+AE组1d、4d ALP活性均高于对照组(P<0.05),且MSC+CE组1d、4d、7d ALP活性高于MSC+AE组(P<0.05)。成骨诱导培养条件:1d、4d、7d ALP活性表达情况由高到低依次为细粒棘球绦虫原头节共培养组高于泡状棘球绦虫原头节共培养组高于间充质干细胞组(P<0.05)。Western blotting结果显示:细粒棘球蚴造模组和泡状棘球蚴造模组RUNX2蛋白表达高于空白对照组(P<0.05);普通培养条件:MSC+CE组和MSC+AE组1d、4d BMP2、RUNX2、P-Smad1/5/8蛋白表达高于对照组(P<0.05),MSC+CE组1d、4d、7d BMP2、RUNX2、P-Smad1/5/8高于MSC+AE组(P<0.05);成骨诱导分化培养条件:共培养7d间充质干细胞组钙化相关蛋白BMP2、RUNX2、P-Smad1/5/8的表达量均显著高于泡状棘球绦虫原头节共培养组和细粒棘球绦虫原头节共培养组(P<0.05)。RT-qPCR结果显示:细粒棘球蚴造模组和泡状棘球蚴造模组RUNX2 mRNA水平高于空白对照组(P<0.05);普通培养条件:1d、4d、7d RUNX2 mRNA表达由高到低依次为MSC+CE组、MSC+AE组和对照组(P<0.05);1d、4d、7d BMP2 mRNA表达MSC+CE组高于MSC+AE组和对照组(P<0.05),而MSC+AE组1d、4d BMP2 mRNA表达无统计学差异(P>0.05);成骨诱导分化培养条件:共培养7d间充质干细胞BMP2、RUNX2、OCN和Smad1 mRNA表达水平表达量低(P<0.05),细粒棘球绦虫原头节共培养组RUNX2 mRNA表达水平显著高于泡状棘球绦虫原头节共培养组(P<0.05)。结论1.棘球蚴病病灶周围肝组织矿化的发生发展与其自然病程相关;2.泡状棘球绦虫原头节和细粒棘球绦虫原头节均促进间充质干细胞早期钙化进程且细粒棘球绦虫原头节促进作用更强;3.间充质干细胞成骨诱导分化进程能被棘球绦虫原头节抑制,其机制可能与棘球绦虫原头节对间充质干细胞钙化存在双相调节有关。
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