重组5型腺病毒载体已经被广泛应用到肿瘤的基因治疗的研究中，并且在一些例如乳腺癌，膀胱癌，结肠癌等肿瘤疾病中取得了良好的肿瘤抑制效果。但是，重组腺病毒在注射到人体通过血液循环进入靶组织的过程中大量的向肝组织中富集，给肝组织造成了巨大的压力。本论文根据课题组前期研究基础，设计构建新型的重组5型腺病毒载体，希望能够在体内实现安全而又高效抑制肿瘤细胞的生长。新型重组5型腺病毒载体根据腺病毒感染宿主细胞过程中涉及的三种主要结合方式进行对腺病毒基因组进行修饰，来降低病毒在肝组织中的富集。通过在腺病毒的HI-loop环上加入RGD（Arg-Gly-Asp）小肽，增强腺病毒对多种肿瘤细胞（无CAR或低CAR表达）的感染和表达能力。在腺病毒knob区进行点突变，改变病毒与CAR受体的结合位点，降低由fiber纤毛蛋白与CAR受体介导的结合过程，从而降低载体感染肝细胞的能力。通过将5型腺病毒六邻体的HVR区的HVR5和HVR7替换成26型腺病毒的对应区域，降低病毒载体HVR区与FX因子结合介导的进入宿主细胞的过程。另外，利用端粒酶启动子hTERT携带自杀基因HSV-TK，实现5型腺病毒载体特异的杀伤肿瘤细胞，降低其全身毒性，进一步增强体内安全性。本文构建在Ad5-RGD的基础上构建了Ad5-mu-RGD和Ad5-HVR26-mu-RGD，其中Ad5-mu-RGD的构建较为顺利，目前已完成体外病毒感染活性评价实验和体外肿瘤杀伤实验并利用活体成像以及荧光实时定量PCR的手段分析了其在体内的感染和分布情况。结果显示：在不同CAR受体表达水平的肿瘤细胞中，重组腺病毒Ad5-mu-RGD和骨架未经过修饰的重组腺病毒Ad5-luc感染能力的高低各有不同，充分的验证了在腺病毒进入宿主体内的过程中重组腺病毒RGD短肽结合不同细胞表面整合素能力的高低导致的影响的不同。重组病毒Ad5-luc和Ad5-RGD-luc相比存在感染能力上的差距，证明了在腺病毒knob区HI-loop插入RGD基序可以广泛地提高腺病毒进入不同肿瘤细胞的能力。在对正常肝细胞的感染能力上Ad5-mu-RGD-luc明显低于Ad5-RGD-luc，表明把AB-loop的Ser408、Pro409进行点突变起到了预期的效果，降低了病毒在肝的富集能力，减轻了病毒在治疗肿瘤的过程中带给肝脏的压力。抗肿瘤活性的体外评价上，携带自杀基因的重组腺病毒对于不同肿瘤细胞的杀伤活性有所不同。相关的体内的肿瘤杀伤试验和肝组织损伤分析目前正在进行。Ad5-HVR26-mu-RGD目前完成了其构建，正在进行病毒的包装。