毛细管电泳(CE)是上世纪80年代发展起来一项重要的分离分析技术,由于其具有低成本、低消耗、低污染、高灵敏度、高分辨率、高速度等优点,符合生命科学、医学、环境科学等领域越来越苛刻的分离分析要求,得到了迅猛的发展而成为目前强有力的分析技术之一。CE激光诱导荧光检测法是目前最灵敏的检测方法之一,然而由于激光器的成本高、体积大、可选择的波长少等因素,制约了其发展和应用。随着高亮度发光二极管(LED)的出现和发展,以LED作为荧光检测装置的激发光源,可以大大减小体积和降低成本,为CE的发展和应用提供了更广阔的前景。量子点(QDs)是近年发展起来的一种新型荧光探针,与传统的有机荧光染料相比,具有更优良的光谱性能。其吸收光谱较宽,不同的量子点可以由同一波长的光激发,而不同的有机荧光染料分子,则常常需要采用不同波长的光来激发。量子点不易漂白,发射光谱与粒径大小有关,通过调整其粒径大小,可以发出不同颜色的荧光,从而使不同生物分子的标记、区分、识别变得更加容易,在生物化学、细胞生物学、分子生物学等研究领域显示了极其广阔的应用前景,探索其在毛细管电泳分析中的应用,具有深远的意义。本文运用实验室自组装的CE光导纤维LED诱导荧光检测装置,建立了几种生物活性物质的分析方法,包括对免疫球蛋白IgG、肾上腺素(EP)和多巴胺(DA)的分离检测,另外还探讨了量子点荧光探针代替其它有机荧光染料,在毛细管电泳分析中的应用。其研究工作主要包括以下几个部分:1.合成了水溶性CdTe量子点,并采用共价偶联法,用CdTe量子点标记谷胱甘肽。在本实验室自行设计、组装的毛细管电泳光导纤维发光二极管诱导荧光检测装置上,以紫色LED作为激发光源,对量子点荧光探针及其标记的生物小分子(谷胱甘肽)进行分离,证实了量子点荧光探针在毛细管电泳应用的可行性。2.建立了CE光导纤维LED诱导荧光检测直接测定免疫球蛋白IgG的新方法。该方法以蓝色的LED作为荧光检测器的激发光源,荧光素异硫氰酸酯(FITC)作为柱前衍生试剂,采用毛细管区带电泳,以pH 9.2的硼砂溶液为电泳缓冲液进行分离检测。在优化的实验条件下,IgG的线性范围是4.5×10-8～1.2×10-6g/L,检测限为2.0×10-8 g/L。将该方法应用于人血清中IgG含量的测定,不需要进行前期处理,具有简单、高效、灵敏度高、经济选择性好等特点。3.应用CE光导纤维LED诱导荧光检测装置,建立了同时测定肾上腺素(EP)和多巴胺(DA)的方法。采用胶束电动色谱分离模式,通过优化分离电压、十二烷基硫酸钠(SDS)浓度、背景电解质浓度和pH等影响因素,确定了最佳实验条件,在该条件下, EP和DA的线性范围分别为2.2×10-9～1.1×10-7 mol/L和2.6×10-8～1.2×10-6 mol/L, EP和DA的检测限(S/N=3)分别为1.2×10-9 mol/L和1.1×10-8 mol/L。将该方法应用于人血浆中EP和DA含量的测定,结果满意。