羊驼伪结核棒状杆菌的分离鉴定及其致病性研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tangtieming1983
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伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,C.p)是一种人畜共患病原菌,主要感染羊,引起干酪样淋巴结炎(Caseous lymphadenitis,CLA),也能感染马、牛、骆驼、羊驼等多种动物,但国内未见有羊驼感染该菌的报道。该菌经呼吸道、消化道和伤口传播,在世界范围内广泛流行,给养殖业和公共卫生都带来了危害。CLA可以根据感染部位分为体表型、内脏型和混合型,一般采用病原学、血清学与分子生物学诊断。2021年8月以来,四川成都某羊驼养殖场部分羊驼的四肢和胸腹部皮肤陆续出现化脓性感染。养殖场使用多种抗生素和防治措施效果不佳。该羊驼场共有羊驼120只,发病率20.0%(24/120),死亡率7.5%(9/120),造成较为严重的经济损失。结合病史和临床检查,初步怀疑C.p是该养殖场羊驼发病的主要致病菌。为进一步确诊该病,采集患病羊驼皮下脓液和死亡个体内脏组织样本25份进行细菌分离鉴定(包括细菌培养、形态学观察、生化试验、16S r RNA鉴定以及系统进化树构建)、部分生物学特性测定(包括生长曲线测定、抗生素药敏试验和耐药基因携带情况)和致病性试验(包括溶血试验、毒力基因检测、小鼠致病性试验),试验结果如下:(1)通过细菌的分离纯化和16S r RNA基因测序,得到3株C.p,序列长约1500bp,分别命名为A1、A2、A3。(2)药敏检测结果显示3株分离株均对青霉素(PG)、头孢噻肟(CTX)、美罗培南(MEM)、红霉素(EM)等多种药物敏感;A1对氨苄西林和多粘菌素B耐药,A2对氨苄西林耐药,A3对头孢唑林和链霉素耐药;A1携带耐药基因bla TEM,A3携带耐药基因bla CTX-M,A2未检出;3株菌均携带五种重要的毒力基因:pld、fag A、fag B、fag C、fag D。(3)将C.p分离株菌悬液按照浓度为1×10~9CFU/m L,剂量0.2 m L/只分别经腹腔和皮下注射小鼠。腹腔注射组小鼠6-24 h死亡,皮下注射组小鼠1周内无死亡,但在3 d后注射部位皮下开始化脓,皮肤出现溃烂坏死。腹腔注射组死亡小鼠剖检见胃肠道明显扩张,肠道内充满淡黄色水样内容物。皮下注射组小鼠于7 d后处死,解剖发现脾脏明显肿大,肝脏、肺脏可见出血点,其他器官肉眼未见明显病变。小鼠组织病理学结果显示,肝、脾、肺、胃、肠均可见炎性细胞浸润;肝脏小灶性坏死,肺大面积肺泡壁增厚,肾小管扩张,肾小管上皮细胞点状坏死,胃壁固有层少量的肠腺扩张,胃组织大量细胞脱落,大肠组织可见肠壁较薄,肌纤维排列疏松。综上所述,本研究首次在国内报道了羊驼感染C.p,且证实分离株具有较强的致病性,导致羊驼发生混合型CLA;同时还检测了分离株的耐药基因和毒力基因。这些研究为羊驼CLA的防控提供了科学依据。
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