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目的:本文构建真核基因双表达载体pBudCE4.1-dll4-16,并将构建的真核双表达载体通过Lipofectamine 2000转染慢性粒细胞白血病细胞株K562,观察目的基因在白血病细胞株K562中的表达情况,进而研究其对白血病细胞增殖情况的抑制作用,为进一步研究多种基因同时用于肿瘤治疗奠定一定基础。方法:本文构建真核双表达载体pBudCE4.1-dll4-16,该载体包含野生型dll4cDNA、p16cDNA基因,同时构建对照组质粒pBudCE4.1-dll4、pBudCE4.1-16。通过脂质体法将各组质粒转染入白血病细胞K562中,分为三阶段:一是转染48小时后,收集各组细胞,用RIPA裂解细胞,免疫印迹法检测外源性目的基因瞬时转染的表达水平;二是通过Cell Counting Kit-8(CCK-8),描绘各试验组细胞的生长曲线;三是转染48小时后,经70%预冷乙醇固定,PI染色后,通过流式细胞仪检测各试验组细胞的周期分布情况。结果:本实验成功构建了真核表达载体pBudCE4.1-dll4、pBudCE4.1-16及真核双表达载体pBudCE4.1-dll4-16,通过限制性核酸内切酶酶切方法鉴定插入基因的位点与预期相符。通过脂质体法将各组质粒成功转染入白血病细胞株K562中,转染后48小时,采用免疫印迹技术检测到野生型dll4、p16基因在白血病细胞K562中的表达水平:实验组(质粒pBudCE4.1-dll4-16转染组)和对照组1(质粒pBudCE4.1-16转染组)细胞均表达P16蛋白,其余三组均不表达;实验组(质粒pBudCE4.1-dll4-16转染组)及对照组2(质粒pBudCE4.1-dll4转染组)细胞均高度表达dll4蛋白,其余三组均中度表达。转染48小时后,通过PI染色处理,经流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期分布情况,相比较于对照组,实验组细胞G0/G1期增多,差异有显著统计学意义(P<0.001)。细胞生长曲线显示,细胞生长受到明显抑制,尤其是实验组细胞。结论:重组的双表达质粒pBudCE4.1-dll4-16能在白血病细胞K562中共同表达目的基因,诱导细胞周期停滞于G0/G1期,抑制细胞生长,但不诱导细胞凋亡。