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【研究背景】梗阻性黄疸(梗黄,OJ)在临床上常见,梗黄患者感染、败血症和营养不良等并发症较高。临床解除胆道梗阻有两种方法,胆汁内引流术和胆汁外引流术。胆汁内引流术(经内镜胆管支架植入术)可以恢复胆汁的肠肝循环,患者恢复较好,长期观察感染率低；相反,胆汁外引流术(经内镜鼻胆引流、T管引流、经皮经肝胆汁引流等)使胆汁丢失,远期观察患者恢复较差,容易出现感染和营养不良。我们前期研究证实胆汁内引流术可明显改善梗阻性黄疸时内毒素血症及细胞因子分泌紊乱,胆汁外引流术作用不明显,甚至使大鼠免疫功能恶化。胆汁内引流术与外引流术的根本区别在于胆汁重新进入肠道,肠肝循环重新建立和机体胆汁酸池稳态得以恢复,提示胆汁酸在胆汁内引流术优于外引流术的机制方面扮演着重要角色。国外学者较早即提出胆汁酸具有免疫调节功能,能够降低内毒素相关细胞因子的释放,减少梗阻性黄疸时内毒素相关并发症的发生率；我们近期研究亦证实亲水性胆汁酸能拮抗内毒素对Kupffer细胞的影响,降低其活化程度,抑制Kupffer细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达。胆汁酸作为信号分子通过胆汁酸受体途径调节机体免疫功能的研究,国内尚未开展。我们提出假设：胆汁酸作为信号分子与胆汁酸细胞膜受体TGR5结合后激活信号传导通路,调节TGR5在Kupffer细胞的表达,通过激活TGR5-cAMP途径改善Kupffer细胞免疫功能。【研究目的】利用改进的梗阻性黄疸及胆汁内外引流动物模型,检测Kupffer细胞胆汁酸受体TGR5及其mRNA的表达,探讨胆汁酸通过细胞膜受体TGR5对Kupffer细胞功能影响的机理,进一步阐明胆汁内引流术优于外引流术的机制。[材料与方法]采用成年雄性Sprague-Dawley大鼠66只,随机分为4组,即梗阻性黄疸组(OJ,n=17)、胆汁内引流组(ID,n=20)、胆汁外引流组(ED,n=14)和假手术组(SH,n=15)。利用改进的造模方法建立动物模型：第一次手术建立OJ模型(分离胆管并结扎切断)和SH模型(只分离胆管),第8天在OJ模型基础上实施二次手术,建立ID模型(膨大胆管与十二指肠间建立引流)和ED模型(胆管插管经皮引流体外)；OJ组及SH组第8天留取标本,ID组和ED组第15天留取标本。采用免疫组织化学染色及半定量分析方法测定各组大鼠Kupffer细胞胆汁酸受体TGR5表达情况；采用IV型胶原酶原位逆行灌注、Percoll液密度梯度离心及细胞贴壁培养的方法分离、纯化并培养枯否细胞,通过实时荧光定量PCR技术(RTQ-PCR)测定各组大鼠Kupffer细胞胆汁酸受体TGR5 mRNA表达情况。【结果】成功建立四组大鼠动物模型。胆汁酸受体TGR5在大鼠肝脏Kupffer细胞的细胞膜及胞内小室均有表达,肝窦状内皮细胞、胆管内皮细胞的细胞膜及部分肝细胞的细胞膜也呈阳性反应。OJ组大鼠Kupffer细胞TGR5平均积分光密度值(0.5134±0.0701)较SH组(0.3050±0.0998)明显增高(P<0.01)；ID组TGR5表达明显下调(0.3556±0.0508),与OJ组比较差异显著(P<0.01),但表达程度与SH组无差异(P=0.22)；ED组(0.4389±0.0782)与OJ组比较不具有统计学意义(P=0.062)。OJ形成后大鼠肝脏Kupffer细胞TGR5 mRNA表达明显增高(OJ vs SH,1.0244±0.3248 vs 0.1327±0.0452,P<0.01)；胆汁内引流术后TGR5 mRNA表达明显降低(OJ vs ID,1.0244±0.3248 vs 0.3198±0.1147,P<0.01),且能恢复到正常水平(IDvsSH,0.3198±0.1147 vs 0.1327±0.0452,P=0.354)；胆汁外引流术后TGR5 mRNA表达亦减弱(OJ vs ED,1.0244±0.3248vs 0.6322±0.2332,P=0.003),但无法恢复到正常水平(EDvsSH,0.6322±0.2332 vs 0.1327±0.0452,P<0.01)；胆汁内引流术较外引流术能降低TGR5 mRNA的表达(IDvsED,0.3198±0.1147vs 0.6322±0.2332,P=0.025)。【结论】梗阻性黄疸大鼠肝脏Kupffer细胞TGR5及其mRNA表达显著增强。胆汁内引流术可完全逆转这种改变,而胆汁外引流术仅部分恢复。提示胆汁内引流术优于外引流术的机制可能与Kupffer细胞胆汁酸受体TGR5及其mRNA的表达调控有关。