论文部分内容阅读
目的：观察由携带HPV-16E6/E7基因的树突状细胞(Dendritic cell,DC)疫苗免疫得到的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)在裸鼠体内对宫颈癌的抑制作用及相关机制的研究。方法：体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(Immature DC，imDC)，将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)-16E6/E7基因的重组腺病毒感染imDC，Western blot检测E7蛋白的表达；构建裸鼠的人宫颈癌CaSki细胞移植瘤模型，应用DC疫苗诱导的BALB/c小鼠脾脏的CTL（Cytotoxic T lymphocytes）处理后，观察裸鼠肿瘤体积变化，肿瘤长出第28d后处死裸鼠，小心剥下肿瘤组织，石蜡包埋，HE染色观察各组肿瘤的细胞形态，免疫组织化学技术法检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。CCK8(Cell counting kit8)法检测经DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖；免疫组化法检测裸鼠脾脏组织CD4+T淋巴细胞的表达。结果：成功培养出DC并制备出DC疫苗；第28d各组裸鼠肿瘤体积pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组与对照组pAd-mock-DC-CTL-CaSki组、DC-CTL-CaSki组、CaSki组相比较，pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组裸鼠肿瘤体积最小（P<0.05）；免疫组化检测肿瘤组织中Bax蛋白的表达结果显示：pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组最高，而对照组CaSki组表达最低；免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达结果显示：pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组最低，而对照组CaSki组表达最高。CCK8法检测经DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞的增殖，结果表明：pAd-E6/E7-DC组淋巴细胞OD值明显高于pAd-mock-DC组、DC组和PBS组（P<0.01）；免疫组化检测各组裸鼠脾脏组织CD4+T淋巴细胞的表达结果显示：pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki组CD4+表达量最高，pAd-mock-DC-CTL-CaSki组和DC-CTL-CaSki组CD4+表达量次之，CaSki组CD4+表达量最低。结论：带有HPV-16E6/E7基因修饰的DC疫苗，能够促进小鼠体内T淋巴细胞的增殖，诱导CTL抑制裸鼠宫颈癌移植瘤的生长。