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目的:阿霉素诱导建立人肝癌多药耐药细胞系,检测家蝇幼虫抗菌肽对耐药细胞的抑制作用,探究抗菌肽对肝癌细胞耐药性的逆转作用及机制。方法:1.采用阿霉素小剂量持续培养、浓度梯度递增法建立人肝癌耐药细胞系。2.培养细胞,绘制细胞的生长曲线,计算细胞倍增时间。3.采用MTT法检测细胞对抗菌肽和阿霉素、紫杉醇等化疗药物的敏感性。4.细胞侵袭实验检测抗菌肽对细胞侵袭性的影响。5.荧光显微镜观察细胞内阿霉素的荧光强度。6.流式细胞仪检测细胞周期分布、细胞凋亡率、细胞内阿霉素含量以及细胞表面P-gp表达情况。7.荧光定量PCR法检测细胞多药耐药基因的表达情况。结果:1.建成了可以在含0.5μg/mL阿霉素的完全培养基中稳定生长的细胞,命名为Bel-7402/ADM细胞,细胞的形态和大小与亲本细胞基本相似,但是Bel-7402/ADM细胞的倍增时间较亲本细胞延长（P<0.05）,细胞增殖速度减慢。2.MTT检测结果:（1）建成的Bel-7402/ADM细胞对阿霉素的耐药指数为10.96,且细胞对5-Fu、长春新碱、紫杉醇、顺铂以及吉西他滨也不同程度耐药,是多药耐药的细胞系。（2）抗菌肽对细胞的毒性作用结果显示:家蝇幼虫抗菌肽对Bel-7402和Bel-7402/ADM细胞都有抑制作用,且具有剂量依赖性,但是抗菌肽对耐药细胞的半数抑制浓度更低（P<0.05）。3.细胞周期结果:（1）耐药细胞Bel-7402/ADM的周期分布较Bel-7402细胞发生明显变化,其处在G0/G1期细胞比例明显增多（P<0.05）,S期的细胞比例降低（P<0.05）。（2）抗菌肽作用后Bel-7402和Bel-7402/ADM细胞均发生G0/G1期比例明显升高（P<0.05）,S期比例下降明显（P<0.05）。4.细胞凋亡检测结果:抗菌肽作用后Bel-7402、Bel-7402/ADM细胞早期凋亡率均发生明显升高（P<0.05）。5.细胞侵袭实验结果:抗菌肽作用后Bel-7402和Bel-7402/ADM细胞的侵袭能力均明显减弱（P<0.05）。6.抗菌肽对细胞耐药性的影响:经过小剂量抗菌肽处理后,阿霉素对Bel-7402/ADM细胞的半数抑制浓度明显降低（P<0.05）,细胞耐药指数减小。而低剂量抗菌肽几乎不影响Bel-7402细胞对阿霉素的敏感性（P=0.61）。7.细胞内阿霉素荧光检测:（1）荧光显微镜观察结果:Bel-7402/ADM细胞的荧光明显弱于Bel-7402细胞;小剂量抗菌肽处理后Bel-7402细胞内的荧光强度看不出明显变化,而Bel-7402/ADM细胞的荧光明显增强。（2）流式细胞仪检测结果:Bel-7402/ADM细胞的平均荧光强度明显低于Bel-7402细胞;经抗菌肽处理后,Bel-7402/ADM细胞的平均荧光强度明显增高（P<0.05）,而Bel-7402细胞平均荧光强度增多不明显（P=0.09）。8.细胞表面P-gp的含量检测结果:P-gp抗体标记细胞后,Bel-7402/ADM细胞的荧光强度明显高于Bel-7402细胞;抗菌肽处理后Bel-7402/ADM细胞表面的荧光强度较未处理组荧光强度明显降低（P<0.05）。9.荧光定量PCR结果:Bel-7402/ADM细胞MDR1的相对表达量明显高于Bel-7402细胞（P<0.05）;抗菌肽作用后,Bel-7402/ADM细胞MDR1的相对表达量降低（P<0.05）。结论:1.建成了耐药性肝癌细胞系Bel-7402/ADM,细胞对临床常用化疗药阿霉素、紫杉醇、长春新碱、5-Fu、顺铂和吉西他滨均不同程度耐药,是多药耐药的细胞系。2.Bel-7402/ADM与亲本细胞形态相似,但是细胞周期较亲本细胞延长、细胞增殖速度减慢。3.家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌细胞Bel-7402和Bel-7402/ADM均有抑制作用,且对Bel-7402/ADM细胞的抑制作用更强。4.家蝇幼虫抗菌肽粗提物可以通过影响肝癌细胞的周期分布、诱导细胞凋亡和抑制细胞侵袭性起到抗癌的作用。5.家蝇幼虫抗菌肽粗提物可以降低多药耐药细胞Bel-7402/ADM的耐药指数,促进化疗药物进入细胞膜内,逆转了Bel-7402/ADM细胞的耐药性。6.家蝇幼虫抗菌肽粗体物可能通过抑制多药耐药基因1（MDR1）的表达减少了细胞膜表面P-gp的含量,从而逆转了Bel-7402/ADM细胞的耐药性。