安梨中三萜类化合物的分离提取与成分分析

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安梨属于蔷薇科(Rosacease)梨亚科(Pomoidease)秋子梨系统。本文以安梨为原料,主要研究安梨中的三萜类化合物的提取分离、成分分析和生理活性,为安梨的开发利用奠定理论基础。主要研究结果如下:1.提取分离筛选了安梨总三萜的最佳提取工艺。分别采用热回流法提取、微波辅助提取法和加压溶剂萃取法,对安梨总三萜含量进行测定。确定加压溶剂萃取法为安梨总三萜的最佳提取方法,工艺条件为:萃取温度85℃、萃取时间4min、循环次数3次、乙醇浓度55%,总三萜提取率可达8.62%。因此本文采用加压溶剂萃取法提取安梨总三萜。利用硅胶柱层析、大孔树脂对安梨提取物进行初步分离纯化,Sephadex LH-20柱层析和HPLC高效液相色谱法对样品进一步纯化。2.成分分析通过LC-MS分析,确定安梨中含有三萜类、黄酮类等化学成分,从中鉴定出16种三萜类成分,分别为刺梨酸、白桦脂酮酸、齐墩果酮酸、坡模酮酸、朦胧木酸、齐墩果酸、熊果酸、白桦脂酸、7-去氢燕麦甾醇、豆甾-4,22-二烯-3-酮、白桦脂醇、灵芝醇A、算盘子酮、Nebrosteroid D、Nebrosteroid E、24-去氢胆固醇;鉴定出12种黄酮类成分,分别为木犀草素7-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-鼠李糖基半乳糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、木犀草素7-O-葡萄糖苷、木犀草素4’-O-葡萄糖苷、异鼠李素鼠李糖基半乳糖苷、异鼠李素鼠李糖基葡萄糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-4’-O-葡萄糖苷、异鼠李素半乳糖苷、异鼠李素葡萄糖苷、柯伊利素-7-O-葡萄糖苷,12种黄酮类成分。其中11种三萜类成分刺叶丝石竹酸、白桦脂酮酸、齐墩果酮酸、坡模酮酸、朦胧木酸、7-去氢燕麦甾醇、豆甾-4,22-二烯-3-酮、表羽扇豆醇、灵芝醇A、算盘子酮、Nebrosteroid D、Nebrosteroid E、3,7-二羟基豆甾-1-酮、酒酵母甾醇、24-去氢胆固醇首次在梨属植物中发现。3.生理活性研究利用DPPH法对安梨提取物进行抗氧化活性研究,乙酸乙酯层提取物对DPPH自由基的最高清除率为60.47%,正丁醇层提取物对DPPH自由基的最高清除率为51.98%。试验表明,乙酸乙酯层提取物具有较强的抗氧化活性。通过磺酰罗丹明B(sulforhodamine B, SRB)蛋白染色法对安梨提取物进行抗肿瘤活性的筛选,当样品浓度为1mg/ml时,乙酸乙酯层提取物对人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制率高达66.3%,正丁醇层提取物对人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制率为32.7%。试验表明,乙酸乙酯层提取物对人肝癌细胞Bel-7402的生长具有较强的抑制活性。
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