背景：曲霉菌是自然界中广泛存在的真菌,是引起免疫抑制患者侵袭性真菌感染(IFI)的主要病原菌。侵袭性曲霉病(IA)主要发生在免疫低下患者,如急性白血病、造血干细胞移植、实体器官移植、恶性肿瘤化疗等。近年来的流行病学研究表明IA的发病率有逐年增多的趋势,在尸解病例中超过了念珠菌感染。本病的病死率很高,可达40%以上,晚期衰竭病人合并曲霉菌感染的病死率高达80%-100%。造成这种高死亡率的原因之一是IA的临床表现缺乏特异性,而传统的实验室诊断包括真菌的培养、影像学诊断,不仅耗时较长,而且敏感性差不能满足要求,其早期诊断十分困难。因此,如何提高IA的早期特异性诊断水平已成为国内外临床工作者们共同关心的热点问题。目前研究最多也最有发展前景的是血清学方法和分子生物学方法。目的：(1)通过对侵袭性曲霉菌病(Invasive aspergillosis disease, IA)高危血液病患者进行半乳甘露聚糖(galactomannan,GM)检测,评价GM在我院血液病患者IA早期诊断及疗效监测中的价值。(2)建立同时检测三种曲霉菌的实时荧光定量PCR (real-time PCR)方法,探讨其临床应用价值。方法：收集2008年9月-2009年9月我院血液科住院血液病患者中,按照我国2007年血液病／恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则(修订版),前瞻性诊断为IFI拟诊以上的患者,抽取血液样本,分离血清,采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法和Real-Time PCR方法检测血清标本的GM值和曲霉菌DNA量,其中GM试验阳性定义A值>0.5,Real-Time PCR以连续两份标本Ct值≤30定义为阳性。并根据我国制定的血液病／恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染(IFI)的诊断标准和治疗原则结合回顾性判定标准,将研究对象分为确诊IA、可疑IA和排除IA三个类别,分别研究和对比两种诊断试验的评价指标。结果：满足入选标准的有54例患者,根据回顾性判定标准,54例患者中分为确诊IA组13例,疑似IA组24例,排除IA组17例。(1)GM ELISA检测结果的评价指标为灵敏度84.6%、特异度82.4%、阳性预测值78.6%、阴性预测值87.5%。根据IFI诊断标准结合GM检测,GM检测前有14例患者达到临床诊断IA,通过GM检测则增加至27例,提高了临床诊断IA例数。(2)临床诊断IA患者中出现主要影像学表现的阳性率为35.7%,GM检测的阳性率为80%,二者有明显差异(P=0.047)。拟诊IA患者中出现主要影像学表现的阳性率为18.2%,GM检测阳性率为71.4%,二者有明显差异(P=0.049)。在肺部CT显示有晕轮征或空气新月征且GM为阳性的7例患者中,有6例GM检测阳性比CT证据提早出现,中位提前天数为5.5天。在阳性检出率和阳性检出时间方面,GM检测都优于影像学检查。(3)所有接受抗真菌治疗的GM阳性组患者,治疗有效的17例患者中,GM值随着治疗逐渐下降,GM值由1.81±1.07下降到0.95±0.48,差异具有显著性意义(p=0.000)。治疗无效的4例患者中,复查监测血清GM值在治疗后无明显变化(P=0.748)或有轻微升高。动态检测血清GM值,可判断抗真菌治疗疗效及评估预后。(4) real-time PCR能特异性扩增出三种曲霉菌菌株18S rRNA,检测灵敏度为103fg/ul。采用连续两次CT≤30作为PCR界值时,其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为92.3%、94.1%、92.3%、94.1%。(5)二种检测方法联合诊断敏感度为100%,特异度为76.5%,阳性预测值为76.5%,阴性预测值为100%。二者联合,诊断的敏感度明显提高,特异度仅轻度下降。结论：GM检测以I值>0.5,Real-Time PCR以两份标本Ct值≤30定义为阳性,可以获得较高的敏感度及特异度。两种检测方法联合检测诊断IA敏感性更高。血清GM检测和Real-time PCR提高IA阳性检出率、提前阳性检出时间,可以为早期诊断IA提供帮助。动态检测GM值,有利于疗效观察及预后评价。