研究目的:头颈鳞癌（Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC）是一种常见的,具有较高侵袭性的恶性肿瘤,发病率在人类所有肿瘤疾病中排名第六位。超过50%的头颈鳞癌患者就诊时处于晚期,5年总体生存率约为50%。虽然近几十年我们在多种肿瘤的预防、早期诊断和多模式联合治疗等多个方面取得了一些进展,但对头颈鳞癌患者总体预后的提高却十分有限。因此,探讨HNSCC启动和恶性进展的潜在分子机制对于提高患者的总体生存率至关重要。表观遗传修饰参与调控肿瘤的增殖、凋亡、迁移侵袭和治疗抵抗等多种恶性进程。其中,N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）作为真核生物中最普遍、最常见的RNA表观遗传调控方式,受到了越来越多的关注。m6A甲基化修饰是一个动态且可逆的过程,主要由“书写者”（甲基转移酶）、“阅读器”（m6A识别蛋白）和“橡皮擦”（去甲基酶）调控。作为主要的阅读器,YTHDF2被证实通过m6A依赖的方式参与了多种类型肿瘤的发生和发展。然而,目前很少有研究探讨YTHDF2在HNSCC发生和恶性进展中的作用和调控机制。研究方法:1.首先通过分析TCGA和GEO数据库的数据,揭示m6A结合蛋白YTHDF2在头颈鳞癌中的表达情况,并通过免疫组织化学检测头颈鳞癌和癌旁非肿瘤组织切片中YTHDF2的表达水平。2.利用慢病毒感染Cal-27和FD-LSC-1细胞来稳定降低头颈鳞癌细胞中目的基因YTHDF2的表达,并通过Western blot和RT-q PCR两种方法验证感染效率。3.分别采用CCK-8法、克隆形成实验、细胞凋亡实验、transwell迁移实验和侵袭实验检测YTHDF2对头颈鳞癌细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。4.建立裸鼠皮下移植瘤模型验证YTHDF2在体内对头颈鳞癌细胞生长的影响。5.通过m6A测序、RNA免疫共沉淀测序和RNA表达谱测序,筛选YTHDF2可能的下游靶基因。研究结果:1.TCGA和GEO数据库分析得到YTHDF2在头颈鳞癌患者样本中高表达。2.CCK-8、克隆形成实验和transwell实验结果证实,敲除YTHDF2能够明显抑制cal-27和FD-LSC-1细胞的增殖、迁移和侵袭。流式细胞仪分析细胞凋亡发现,在cal-27和FD-LSC-1细胞中,相比于对照组,敲低YTHDF2促进了细胞的凋亡。3.小鼠体内肿瘤模型进一步证实,YTHDF2抑制了HNSCC细胞在小鼠体内的成瘤和生长。4.通过Me RIP-seq、RIP-seq和RNA-seq测序结果取交集发现,共有26个重叠基因,为进一步研究YTHDF2通过m6A依赖的方式调控HNSCC发生发展的机制做准备。研究结论:m6A甲基化结合蛋白YTHDF2在HNSCC中高表达,YTHDF2的缺失能够在体内和体外显著抑制HNSCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进HNSCC细胞的凋亡。