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目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染仍是全球性的主要健康问题之一。乙型肝炎及其并发症的发病机制需要进一步研究。本研究探讨HBV反式调节因子X蛋白(HBx)、前S2蛋白(pre-S2)对autotaxin(ATX)表达的影响及其意义,为阐明乙型肝炎及其并发症的发病机制提供实验依据。方法:PCR扩增ATX启动子序列和HBx基因、pre-S2基因,并分别克隆入pGL3-Enhancer和pcDNA3.1(+)中,构建ATX启动子重组荧光素酶报告基因载体p GL3-ATX和HBx、pre-S2重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx、pcDNA3.1(+)-pre-S2,将重组载体共转染HepG2细胞,通过荧光素酶活性检测HBx、pre-S2对ATX基因启动子的作用。构建稳定表达HBx的HepG2.HBx细胞及稳定表达pre-S2的HepG2.pre-S2细胞,Western blotting检测ATX蛋白的表达。结果:双酶切检测和DNA测序均证实重组载体pGL3-ATX和pcDNA3.1(+)-HBx的构建与设计相符。荧光素酶活性检测显示pGL3-ATX荧光素酶活性是空载体pGL3-basic的10倍(P<0.001)。共转染结果显示,pcDNA3.1(+)-HBx+pGL3-ATX组、pcDNA3.1(+)-pre-S2+pGL3-ATX组的荧光素酶活性分别是空载体pcDNA3.1(+)+pGL3-ATX组的1.47倍(P<0.001)和1.15倍(p<0.001)。琼脂糖凝胶电泳检测结果显示HBx和pre-S2基因片段分别在HepG2细胞中稳定表达。Western blotting检测结果显示,HBV稳转细胞株HepG2.2.15细胞、稳定表达HBx的HepG2.HBx细胞和稳定表达pre-S2的HepG2.pre-S2细胞相较于普通HepG2细胞,其ATX蛋白的表达均增强。结论:1.克隆了HBx基因和ATX启动子序列,且ATX启动子序列具有启动子活性;2.构建了HBx重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx和ATX启动子重组荧光素酶报告基因载体pGL3-ATX;3.建立了分别稳定表达HBx和pre-S2基因片段的细胞HepG2.HBx和HepG2.pre-S2;4.HBx和pre-S2均可增强ATX启动子荧光素酶报告基因活性;5.ATX蛋白在普通肝癌HepG2细胞、稳定表达pre-S2基因片段的HepG2.pre-S2细胞、稳定表达HBx基因片段的HepG2.HBx细胞和HBV稳定表达株HepG2.2.15细胞中的相对表达量依次增强;6.HBx和pre-S2可激活ATX基因启动子,上调ATX的表达,提示HBV感染可通过其反式调节蛋白HBx、pre-S2上调ATX表达,增强ATX/溶血磷脂酸信号转导,进而影响宿主细胞生理和病理过程。