论文部分内容阅读
研究目的本研究拟采用药理学手段，分子生物学和行为学手段，采用慢性炎症性大鼠，对P2X7受体传递和转化疼痛信号的作用及其机制进行分析，以便能找到更好的预防治疗慢性疼痛的理论依据。研究方法1．健康，活动正常，没有疾患的雄性Wistar成年大鼠按照对照随机原则分为如下三组：空白组（Naive组），假手术组（Sham组）和完全弗氏佐剂（CFA组），测定各组大鼠机械痛阈和热痛阈基础值后，选择左侧后肢，暴露大鼠踝关节，单关节炎（monoarthritis,MA）模型组抽取50μl完全弗氏佐剂注入关节腔内。假手术组用信的注射器抽取50μl生理盐水注入关节腔里。以上三组大鼠的机械痛阈和热痛阈需要在术后5天再次测定和记录。同时，同样数量的另外的三组模型动物在深度麻醉下解剖处死，取出腰膨大段脊髓背角组织，采用免疫印迹（Western blot）方法检测脊髓背角瞬时感受器电位香草酸受体l(transientreceptor potential vanilloid1, TRPV1)，P2X7R，配体门控型非选择性离子通道6(Purinergicrecepter P2X, ligand-gated ion channel6, P2X6R)，pCREB等的变化，并用免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-Ip）检测P2X7R和PSD-95的相互作用。2．雄性Wistar成年大鼠CFA后的6个不一样的时间点12h，24h，2d，3d，5d，7d，检测pERK，ERK在脊髓背角的表达数量高低情况，并以Sham组为基础，观察在CFA致炎后pERK，ERK在脊髓背角的变化趋势。研究结果1．术前三组大鼠机械痛阈和热痛阈基础值无显著性差异（P>0.05），术后第5天，CFA组出现热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值的降低，与假手术组或者与对侧比较，差异有显著性（P <0.01或0.05）。脊髓腰膨大处pCREB表达水平测定显示，术后5天MA组CREB的磷酸化增加了，与Sham组比较，差异有显著性（P <0.05）。而TRPV1，P2X7R,P2X6R的表达未见显著性变化（P>0.05）；免疫共沉淀发现，CFA大鼠脊髓背角P2X7R和PSD-95的相互作用显著性增加。2．我们在CFA后的不同时间点（12h,24h,2d,3d,5d,7d）,检测脊髓背角pERK,ERK的变化。结果发现，在CFA致炎后的12h，脊髓背角ERK的磷酸化即开始增加，并在随后的7d内，维持在较高的水平。研究结论1．脊髓背角P2X7R参与了大鼠CFA引起的慢性炎症性疼痛，有可能是P2X7R通过别的途径介导CREB，ERK的磷酸化来调节疼痛。2.脊髓背角P2X7R参与了慢性炎症性疼痛发生发展的过程，更有可能是脊髓背角P2X7R通过和PSD-95的相互作用介导了CFA大鼠慢性炎症性疼痛的发生发展。