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目的①建立检测DHX32 mRNA、FLIP(L) mRNA以及FLIP(S) mRNA实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法。②了解DHX32和FLIP在结直肠癌的表达情况及其临床意义。③揭示DHX32和FLIP的关系,探索它们在结直肠癌发生发展中的作用。方法①根据基因数据库和TaqMan实时荧光定量分析原理,应用primer express 2.0软件设计特异针对DHX32、FLIP(L)和FLIP(S)的引物和TaqMan探针。②优化反应条件并进行方法学评价,建立检测DHX32、FLIP(L)和FLIP(S) FQ-RT-PCR的方法。③收集34对新鲜结直肠癌组织及癌旁正常组织和14例结直肠癌组织,提取组织总RNA,逆转录为cDNA,以管家基因β-actin为内标基因,进行实时荧光定量PCR反应,检测各样本中DHX32、FLIP(L)以及FLIP(S)基因的表达水平。④DHX32和FLIP的表达水平结合结直肠癌临床病理特征资料进行分析。结果①成功建立了检测DHX32 mRNA FQ-RT-PCR方法,扩增效率为0.85,特异性好,重复性高(批内和批间CV为1.85%和2.95%)。②75%癌组织和26.4%癌旁组织有DHX32表达。结直肠癌组织中DHX32 mRNA表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。③DHX32 mRNA表达水平与结直肠癌组织学分级、DUKES临床分期、癌栓形成以及淋巴结转移关系密切(P<0.05)。肿瘤的恶性程度越高,DHX32表达水平越高。④成功建立检测FLIP(L) mRNA和FLIP(S) mRNA FQ-RT-PCR方法,扩增效率为0.89和0.88,特异性好,重复性高(批内和批间CV均小于3%)。⑤所有癌组织和癌旁组织都有FLIP mRNA表达。结直肠癌组织中FLIP mRNA表达明显高于癌旁组织(P<0.05)。⑥FLIP mRNA表达水平在结直肠癌组织学分级分组中有显著差异(P<0.05)。肿瘤分化越低,其表达水平越高。⑦DHX32表达水平和FLIP表达水平相关(P<0.01),相关系数r =-0.597。⑧FLIP mRNA中FLIP(L)/FLIP(S)比值与DHX32存在负相关(r =-0.326, P=0.025)。结论①荧光定量RT-PCR检测DHX32 mRNA、FLIP(L) mRNA以及FLIP(S) mRNA FQ-RT-PCR具有敏感、特异、快速、稳定等特点,为检测DHX32、FLIP(L)以及FLIP(S)提供了有效的手段。②DHX32 mRNA在结直肠癌组织中高表达,并与结直肠癌组织学分级、DUKES分期、癌栓形成以及淋巴结转移密切相关,提示DHX32可以作为肿瘤恶性程度评价的参考指标。③FLIP mRNA在结直肠癌组织中高表达,并与结直肠癌组织学分级关系密切,可能通过阻断凋亡通路参与结直肠癌的发生。④DHX32与FLIP关系密切,共同参与结直肠癌的发生发展。