白沙枇杷离体再生及ISSR分子标记研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guizhuyijie
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本研究对白沙枇杷(Eriobotrya japonica Lindl.)的四个品种‘白玉’、‘冠玉’、‘冰糖种’和‘甜种’进行了花药离体培养,初步筛选出了适宜枇杷花药愈伤组织诱导的技术方案,并分别以四个品种的子叶作为外植体,建立了子叶离体再生体系,另外,还运用ISSR分子标记研究了江浙地区枇杷主要种质资源的遗传多样性:1.对四个枇杷品种的花药进行了离体培养,结果表明:四个品种均适宜在盛花中期取材,而3天的4℃低温预处理以及接种后暗培养都会提高愈伤组织诱导率,愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+BA2.0mg/L+IAA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L,但是0.5%至1.0%浓度的活性炭对枇杷花药愈伤组织的诱导具有抑制作用。2.对四个枇杷品种的成熟胚子叶进行离体再生研究的结果为:诱导不定芽再生,‘冰糖种’和‘甜种’的最适培养基为MS+TDZ4.0mg/L,而‘白玉’和‘冠玉’的最适培养基为MS+TDZ3.0 mg/L,另外,以冰糖种为试材,筛选出纵向刻伤的带胚芽单瓣子叶具有最强的不定芽再生能力,暗培养最适时间为21d;增殖培养时,‘冰糖种’和‘甜种’的最适培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L,而‘白玉’和‘冠玉’的最适培养基MS+BA0.75mg/L+NAA0.2mg/L;生根培养中,四个品种的最适培养基均为1/2MS+IBA0.25mg/L+NAA0.25mg/L3.以5′-CCA(GTG)4-3’为引物,‘小白沙’(xiaobaisha)为试材,对枇杷ISSR(Inter-simple Sequence Repeat)反应体系进行了优化。研究表明,25μL ISSR反应体系中,Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的最适浓度和用量分别是:2.0U,1.0mmol/L,0.2μmol/L,40ng和0.2mmol/L。8条ISSR引物在24个枇杷品种中扩增出88条条带,其中多态性条带为50条,多态性比率为56.8%,表明ISSR标记在枇杷上具有较高的多态性。24份材料间遗传相似系数的变化范围是0.167~0.778,聚类结果表明,若以相似性系数0.200为阀值时,可将24份枇杷种质资源分为两类,大致与其原产地相关。
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