枸杞抗坏血酸过氧化物酶基因LmAPX的克隆及表达分析

来源 :天津大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Ada111222333
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
生物或非生物胁迫使植物体内产生过多的活性氧(ROS),若不及时清除,活性氧就会在细胞内快速积累,对植物造成氧化损伤。H2O2是ROS中最稳定的成分之一,也是很多细胞毒素活性氧衍生物的前体物质,盐胁迫是一种典型的非生物胁迫,当植物受到盐胁迫时,体内会产生大量的H2O2,能够破坏植物的生长和代谢。抗坏血酸过氧化物酶存在于高等植物、真核藻类以及某些蓝细菌中,是清除H2O2的关键酶,能够有效地减轻植物体内因活性氧积累造成的氧化胁迫。枸杞是一种多分枝落叶灌木,生长在中国及亚洲其他地区。具有较强的耐旱和耐盐碱性,被认为是解决我国西北土壤盐碱化的先锋植物。本研究以中华枸杞为实验材料,通过同源克隆方法获得枸杞细胞质型抗坏血酸过氧化物酶基因LmAPX,并对该基因进行表达和功能分析,主要研究内容和实验结果如下:1.利用3’RACE方法首次从中华枸杞中分离了细胞质型抗坏血酸过氧化物酶基因LmAPX,并对该基因进行序列分析。LmAPX的cDNA全长为965 bp,其中开放阅读框(ORF)为753 bp,该全长序列的3’端非编码区(3’-UTR)长212 bp,编码250个氨基酸,分子量大小约27.5 KDa。多重序列比对结果显示该基因存在4个高度保守区域,包含3个活性位点H42,W179,D208以及1个结合位点H163。2.构建原核表达载体pET-28a-LmAPX,并在大肠杆菌BL21中高度表达,用1 mmol/L IPTG诱导表达,然后进行细菌蛋白抽提和目的蛋白纯化,利用Lineweaver-Burk双倒数法测定该酶的Km和Vmax值,并对不同温度和pH值下的酶活进行研究。3.构建酵母表达载体pYES2-LmAPX,并导入酵母野生型菌株W303中进行H2O2和NaCl胁迫处理。结果表明含有LmAPX的酵母菌株在不同浓度的NaCl和H2O2的处理下其长势明显优于对照组。4.构建植物表达载体pCAMBIA2300-LmAPX,转化农杆菌工程菌种C58,用叶盘法侵染烟草。Southern杂交结果显示转基因烟草中含有三个LmAPX基因的拷贝。与对照组烟草相比,在受到相同的盐胁迫下,过表达LmAPX基因显著提高了转基因植株的APX活性、脯氨酸含量和净光合速率(Pn),这些结果表明过表达LmAPX基因提高了转基因植株的耐盐性,保护植物免受盐胁迫导致的氧化损伤。
其他文献
目的观察自拟自拟活血散结汤治疗慢性附睾炎的疗效。方法采用自拟活血散结汤(柴胡,橘核,川楝子,虎杖,乳香,没药,归尾,红花,三棱,莪术,川芎,白芍,桃仁等)内服外敷治疗。结果总有效率90.2%。结
利用全量子理论计算方法,研究NPS态光场与运动二能级原子相互作用系统和光场保真度的时间演化规律,分析原子初态、最大光子数、光场参量、原子运动速度、场模结构参量和跃迁
目的观察养胃丹参饮治疗胃脘痛的临床疗效。方法90例胃脘痛患者随机分为治疗组60例、对照组30例,治疗组用养胃丹参饮方随症加减;对照组口服奥美拉唑加胶体果胶铋。均4周为1疗程
【摘 要】意识的概念在《现代汉语词典》中的解释为:意识是人的头脑对于客观世界的反映,是感觉.思维等各种心理过程的总和,其中的思维是人类特有的反映现实的高级形式。在人们的生活.工作的各个环节中都不同程度的受到意识的影响,意识对人体的影响主要包括直接影响与间接影响。歌唱结合了意识对人体的直接与间接的影响。歌唱水平的提高很重要的一个因素是要控制直接意识对人体影响,具体为呼吸、吐字、声区、音色、气息等诸多
【摘 要】所谓“预设”是指教师在课前对教学目标、教学内容、教学过程、教学方法的预先设计。所谓“生成”是指在具体教学中,发展性和不确定性使得有些学生在学习中往往有出色的、出人意料的回答或理解或者对文本理解有困惑、有错误甚至与文本内容看似毫不相干的胡思乱想。这些出色的、出人意料的回答或理解,对文本理解有困惑、有错误甚至与文本内容看似毫不相干的胡思乱想,就是学生在知识、能力或方法上实现自我建构最具价值的
HLA-G是一种非经典的HLA-I类基因,与人免疫耐受相关。限定性表达于母胎界面的绒毛膜滋养层细胞,在诱导母体对半同种异体胎儿的妊娠免疫耐受起着重要作用。一些报道还发现黑色素
【摘要】让学生掌握信息知识、重视学生应用信息能力的培养是学校信息技术教育改革的一个重要目标。但在具体的教学中,很多教师的教学都是离开了问题解决,来讲信息技术知识和技能。本人就如何提高学生信息问题解决能力,结合实际教学,进行了应用研究,取得了明显正面效果。  【关键词】信息问题解决 信息问题解决能力  【中图分类号】G434 【文献标识码】A 【文章编号】2095-3089(2018)17-0286
碳微球由于具有杰出的物化性能,如化学稳定性、热稳定性、优良的导电和导热性等,是一种新兴的具有极大开发潜力和应用前景的碳材料。采用化学气相沉积法、溶剂热法和模板法都