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生物或非生物胁迫使植物体内产生过多的活性氧(ROS),若不及时清除,活性氧就会在细胞内快速积累,对植物造成氧化损伤。H2O2是ROS中最稳定的成分之一,也是很多细胞毒素活性氧衍生物的前体物质,盐胁迫是一种典型的非生物胁迫,当植物受到盐胁迫时,体内会产生大量的H2O2,能够破坏植物的生长和代谢。抗坏血酸过氧化物酶存在于高等植物、真核藻类以及某些蓝细菌中,是清除H2O2的关键酶,能够有效地减轻植物体内因活性氧积累造成的氧化胁迫。枸杞是一种多分枝落叶灌木,生长在中国及亚洲其他地区。具有较强的耐旱和耐盐碱性,被认为是解决我国西北土壤盐碱化的先锋植物。本研究以中华枸杞为实验材料,通过同源克隆方法获得枸杞细胞质型抗坏血酸过氧化物酶基因LmAPX,并对该基因进行表达和功能分析,主要研究内容和实验结果如下:1.利用3’RACE方法首次从中华枸杞中分离了细胞质型抗坏血酸过氧化物酶基因LmAPX,并对该基因进行序列分析。LmAPX的cDNA全长为965 bp,其中开放阅读框(ORF)为753 bp,该全长序列的3’端非编码区(3’-UTR)长212 bp,编码250个氨基酸,分子量大小约27.5 KDa。多重序列比对结果显示该基因存在4个高度保守区域,包含3个活性位点H42,W179,D208以及1个结合位点H163。2.构建原核表达载体pET-28a-LmAPX,并在大肠杆菌BL21中高度表达,用1 mmol/L IPTG诱导表达,然后进行细菌蛋白抽提和目的蛋白纯化,利用Lineweaver-Burk双倒数法测定该酶的Km和Vmax值,并对不同温度和pH值下的酶活进行研究。3.构建酵母表达载体pYES2-LmAPX,并导入酵母野生型菌株W303中进行H2O2和NaCl胁迫处理。结果表明含有LmAPX的酵母菌株在不同浓度的NaCl和H2O2的处理下其长势明显优于对照组。4.构建植物表达载体pCAMBIA2300-LmAPX,转化农杆菌工程菌种C58,用叶盘法侵染烟草。Southern杂交结果显示转基因烟草中含有三个LmAPX基因的拷贝。与对照组烟草相比,在受到相同的盐胁迫下,过表达LmAPX基因显著提高了转基因植株的APX活性、脯氨酸含量和净光合速率(Pn),这些结果表明过表达LmAPX基因提高了转基因植株的耐盐性,保护植物免受盐胁迫导致的氧化损伤。