第一章Nrf2调控线粒体稳态在脓毒症急性肾损伤的保护作用研究研究背景脓毒症是指感染引起的炎症失控性反应而出现危及生命的器官功能障碍,肾脏是脓毒症容易损伤的靶器官,脓毒症合并急性肾损伤在临床上发病率和病死率极高,即使部分患者幸存出院后也有发展为慢性肾脏病的风险。研究证实线粒体损伤在脓毒症急性肾损伤的发病机制中起着关键作用。核因子E2相关因子-Nrf2是细胞拮抗氧化应激反应中的关键因子,此外Nrf2还涉及包括线粒体功能、线粒体生物发生和线粒体自噬的调控,对线粒体稳态的维持起到重要作用。然而,Nrf2与脓毒症急性肾损伤时线粒体相关通路调控之间的关系尚不明确,因此本研究主要关注Nrf2在脓毒症急性肾损伤时表达变化及可能的保护机制研究。研究目的探索Nrf2与脓毒症急性肾损伤关系,以及Nrf2对线粒体稳态的调控作用机制。研究方法1.盲肠结扎穿孔术（CLP）模型构建脓毒症大鼠模型。留取肾脏组织及血清标本,尿素、肌酐水平用于检测肾功能,采用Western blot及免疫组化检测肾脏组织的Nrf2蛋白的表达,HE切片观察肾脏组织形态学变化。2.LPS刺激NRK-52E细胞构建脓毒症急性肾损伤体外模型,验证Nrf2是否激活,采用过表达慢病毒Nrf2转染上调Nrf2,检测细胞损伤指标（细胞活力、凋亡相关蛋白和TUNEL凋亡染色）、氧化应激指标（ROS、MDA和SOD）、炎症指标（TNF-α、IL-6和炎症通路相关蛋白）、线粒体功能相关指标（mt ROS、MMP和ATP）、线粒体生物发生相关蛋白（PGC-1α、TFAM）、线粒体自噬相关蛋白（Parkin、PINK1、LC3）变化,电镜观察细胞线粒体形态学变化、免疫荧光共定位（COXIV和LC3）观察线粒体自噬情况。3.Nrf2激动剂TBHQ或抑制剂ML385预处理实验动物;CLP造模后留取肾组织及血标本,检测肾功能指标、氧化应激指标（MDA和SOD）、炎症指标（TNF-α、IL-6）、HE切片观察肾脏组织形态学变化、线粒体生物发生相关蛋白（PGC-1α、TFAM）、线粒体自噬相关蛋白（Parkin、PINK1、LC3）等变化,同时电镜观察肾脏组织线粒体形态学变化。研究结果1.CLP模型处理,大鼠血清尿素、肌酐水平出现上升,HE染色证实肾脏病理学损伤改变,同时肾组织Nrf2表达上调。2.LPS刺激后,NRK-52E细胞NRF2表达增加,同时核转位增加;Nrf2激活可以缓解LPS可引起细胞损伤（细胞活力下降、凋亡激活）、氧化应激反应（ROS和MDA水平升高、SOD水平下降）、线粒体结构和功能损伤（MMP、ATP和mtROS水平上升）、以及线粒体生物发生抑制（PGC-1α和TFAM表达下调）,能进一步促进线粒体自噬（LC3、Parkin、PINK1表达上调;免疫荧光共定位LC3/COXIV增多）。3.CLP动物模型中,Nrf2激动剂TBHQ可以缓解脓毒症大鼠肾功能损害,Nrf2抑制ML385则加重肾脏损害;Nrf2激活可以促进线粒体自噬和线粒体生物发生相关蛋白表达,ATP生成功能有所恢复,电镜观察线粒体结构损伤减轻。结论1.脓毒症急性肾损伤时Nrf2激活发挥内源性保护作用。2.Nrf2的保护机制可能是通过维持线粒稳态增强线粒体自噬、恢复线粒体生物发生,减轻氧化应激反应和线粒体功能障碍,从而减轻肾小管上皮细胞损伤;靶向提高Nrf2表达可能是潜在的重要治疗靶点。第二章儿童重症监护病房连续性肾脏替代治疗的实践变化与预后关系分析研究目的回顾性分析本中心10年之间儿童重症监护病房CRRT治疗实践的主要变化以及对生存率的影响。研究方法2010年1月至2019年12月间入住我院PICU接受CRRT的患儿临床资料进行分析。收集患儿临床特征和CRRT参数资料,将治疗区间分为2010-2014年间（前期）和2015-2019年间（后期）,比较两个时期患儿存活率的差异、两个时期之间CRRT实践的差异,分析主要CRRT实践变化对患儿预后之间是否存在影响。研究结果总共289名患儿纳入到我们的研究中,患儿存活率在后期显著增高（36.4%vs 58.7%,P=0.001）。统计了两个治疗时期之间主要的实践变化:与前期比较,在后期治疗的病人CRRT启动时间>24h的比例下降（32.73%vs 60.60%,P<0.001）,CRRT启动时FO>10%病人的比例减少（3.8%vs 12.1%,P<0.001）,局部枸橼酸抗凝方案的比例增加（100%vs 22.7%,P<0.001）。亚组分析发现在我们的队列中CRRT启动时间<24 h、局部枸橼酸抗凝方案、FO<10%的接受CRRT治疗的患儿存活率更高。结论在我们中心接受CRRT治疗的患儿的生存率在过去10年中有所提高;CRRT的早期启动,较低的FO%和局部枸橼酸抗凝方法与我们队列中病人预后的改善有关。