生防菌链霉菌株的筛选鉴定及其与木霉菌株T-21的原生质体融合

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lvjieidd
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该论文通过广泛筛选,利用稀释分离法从土壤中分离出一株链霉菌——链霉菌菌株A.采用平板对峙试验测得它对番茄灰霉病菌、茄子褐斑病菌等10种植物病原真菌有明显的抑制作用,抑制率均超过了70%,并确定了其抑菌谱.同时通过室内盆栽防效试验证明其确实对番茄植株灰霉病有防治效果.并对链霉菌菌株A进行了分类鉴定,利用传统分类法,通过对链霉菌菌株A的形态特征、培养特征、生理生化特性、培养条件和拮抗性研究,确定其属金色类群,初步确定了其分类地位.以从土壤中分离出的链霉菌菌株A和已确定对番茄灰霉病菌有较好抑菌效果的木霉菌株T-21作为出发菌株,利用两者在抗生素抗性上的差异,选择庆大霉素(500μg/ml)作为融合子的筛选标记之一.由于木霉菌株T-21没有找到合适的抗生素标记,采用原生质体灭活的方法,使其失去再生能力,仅作为遗传物质的提供者,木霉菌株T-21的原生质体在50℃保温45min即达到致死率为0.对链霉菌菌株A制备原生质体最佳条件进行了摸索.为增加链霉菌菌株A茵丝的松散程度确定在培养液中加入20%蔗糖,分两次培养,使得菌丝在新鲜培养基中能继续生长,避免菌丝断裂及长出孢子.在增加菌丝量的同时,使得菌丝继续处于对数生长期,提高了溶菌效率.第二次加入1%甘氨酸以增加链霉菌菌株A菌丝的敏感性,利于酶解脱壁制备原生质体.并测定了两出发菌株的生长曲线,以确定其对数生长期,链霉菌菌株A为48-60h,木霉菌株T-21为20-33h.测定了酶种类、酶浓度、酶解温度、菌龄等因素对链霉菌菌株A原生质体形成的影响,确定选用溶菌酶(4mg/ml)于32℃酶解处于对数生长期的链霉菌菌株A的菌丝30min即可得到大量原生质体(超过10<7>个/ml).用不损伤原生质体的双层培养法测得两出发菌株的再生率分别为链霉菌菌株A30%左右、木霉菌株T-2150%左右.以40%PEG(MW=4000)作为助融剂,进行融合,在显微镜下观察到了原生质体融合的现象,但无再生菌落长出,分析了原因.
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