【摘 要】
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红曲菌(Monascus)是我国重要的微生物资源,能产生多种生物活性物质,是目前世界上能够生产食用色素的重要微生物之一。但是红曲菌同时也会产生一种有毒物质—桔霉素,阻碍了红
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红曲菌(Monascus)是我国重要的微生物资源,能产生多种生物活性物质,是目前世界上能够生产食用色素的重要微生物之一。但是红曲菌同时也会产生一种有毒物质—桔霉素,阻碍了红曲产品的应用。本文采用基因敲除技术,构建了orf3基因和ctnE基因缺失菌株,分析了其次级代谢产物生产情况,为阐明桔霉素的代谢途径奠定了基础。研究内容及结果如下：1、应用NCBI Blast系统分析orf3基因和ctnE基因,推测出orf3基因编码的蛋白为DIOX-N超级家族,ctnE基因编码的蛋白为NADB-Rossmann超级家族。2、采用PEG-CaCl2介导的原生质体转化技术将置换型打靶载体pORF3-HPH和pCTNE-HPH分别转入橙色红曲菌AS3.4384原生质体中,分别采用潮霉素抗性筛选、PCR验证、打点杂交验证和Southern杂交验证转化子,最终获得2株orf3基因缺失菌株和1株ctnE基因缺失菌株。3、采用HPLC法检测orf3和ctnE基因缺失菌株发酵产物中桔霉素含量；采用紫外分光光度计法检测红曲色素含量。最终发现,2株orf3基因缺失菌株的桔霉素产量与出发株相比,分别降低了87%和86%,红曲色素产量则分别升高了13%和15%,说明orf3基因与桔霉素的生物合成相关,但是该基因的缺失不影响红曲色素的合成；ctnE基因缺失菌株的桔霉素产量较出发株降低了96%,红曲色素产量提高了40%,由此可知,ctnE基因与桔霉素的合成有关,而且该基因的缺失有利于红曲色素的合成。
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