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第一部分伴MyD88 L265P突变淋巴浆细胞疾病患者临床特征分析目的:建立突变扩增系统PCR-毛细管电泳(ARMS PCR-CE)法,采用ARMS PCR-CE法检测淋巴浆细胞疾病患者MyD88 L265P突变检出率,分析合并该突变患者的临床特征。方法:采用ARMS PCR-CE法检测我院送检的81例淋巴浆细胞疾病患者中MyD88 L265P突变的分布,分析该组患者的临床特征。结果:ARMS PCR-CE法较普通PCR测序法可显著提高MyD88 L265P突变的检出率。81例患者中MyD88 L265P突变阳性者25例(30.9%,25/81),其中以华氏巨球蛋白血症(WM)最多见(77.8%,14/18),后依次为淋巴浆细胞淋巴瘤(66.7%,2/3)、急性淋巴细胞白血病(50.0%,1/2)、多发性骨髓瘤(30.0%,3/10)、意义未明的单克隆丙种球蛋白病(25%,1/4)、慢性淋巴细胞白血病(13.0%,3/23)、淋巴瘤(4.8%,1/21)。25例突变患者中20例(80.0%)为IgM型。与未突变组患者相比,突变组患者年龄较大(67对55岁,P<0.001)、WBC较低(5.23×10~9/L对10.8×10~9/L,P=0.001)、HGB较低(85对119 g/L,P<0.001)。25例MyD88 L265P突变患者的定量中位数为3.00%,以此为界,将患者分为突变高表达组和低表达组,与低表达组相比,高表达组男性多见(P=0.030)、血红蛋白计数较低(69g/L对94g/L,P=0.044)、血小板计数较低(77×10~9/L对244×10~9/L,P=0.001)。结论:ARMS PCR-CE法可提高MyD88 L265P突变的检出率,MyD88 L265P突变多见于IgM型淋巴浆细胞疾病,其中以WM多见,与未突变者比较,伴此突变的患者年龄较大,WBC、HGB较低。其预后意义尚未明确。第二部分研究MyD88在多发性骨髓瘤细胞生长中的作用和机制目的:研究MyD88表达对骨髓瘤细胞生长的影响,阐明其在多发性骨髓瘤中的作用及机制。方法:构建了过表达MyD88的慢病毒表达载体,利用该慢病毒表达载体包装病毒,构建过表达MyD88的U266及LP1稳转细胞系,通过脂质体转染的方法,用MyD88干扰质粒瞬时感染U266细胞系。在MyD88过表达和干扰后,分别用CCK8检测骨髓瘤细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Real-Time PCR检测IL-6、MCP-1、TGF-β、TNF-α、VEGF、IFN-γ、IL-10等相关细胞因子表达,c DNA Microarray技术检测过表达MyD88基因后的多发性骨髓瘤基因表达谱变化。结果:检测我中心保存的6株骨髓瘤细胞系:RPMI8226、L363、KMS11、LP1、mm1s和U266,均可见MyD88基因表达。选择MyD88表达较低的LP1细胞系及表达较高的U266细胞系,构建了过表达MyD88的稳转细胞系U266-MyD88、LP1-MyD88。U266-MyD88细胞体外培养24h(P<0.001)、48h(P=0.043)、72h(P=0.024)的OD450值均较U266-Venus增加,LP1-MyD88细胞24h(P<0.001)、48h(P<0.001)、72h(P=0.001)的OD450值亦较LP1-Venus增加。用脂质体转染法建立了干扰MyD88的U266瞬时转染细胞系,该细胞24h(P=0.023)、48h(P<0.001)、72h(P<0.001)的OD450值较对照组减少,干扰U266细胞MyD88后的早期凋亡及总体凋亡较U266-Venus增高,分别为(1.94%VS 1.14%,P=0.002)和(2.983%VS 2.317%,P=0.013)。在U266细胞系中过表达MyD88,IL-6、MCP-1、TGF-β、TNF-α、VEGF较对照组增加,其中TNF-α上调最为明显,约为对照组的4.9倍。而干扰组IL-6、MCP-1、TNF-α、VEGF、IFN-γ、IL-10较对照组下降,其中IFN-γ和IL-10下降更为明显,分别为对照组的0.09倍和0.12倍。基因芯片结果显示MyD88过表达后有171个基因表达水平上调,91个基因表达水平下降,Pathway分析提示多数表达上调基因参与NF-k B通路活化。使用硼替佐米10N剂量处理U266和U266-MyD88细胞,U266-MyD88细胞48h及72h的细胞增殖抑制率分别为51.6%和69.6%,对照组U266-Venus细胞48h及72h的细胞增殖抑制率分别为31.5%和49.3%,差异具有统计学差异。使用硼替佐米20N剂量处理U266-MyD88及U266-Venus细胞,48小时检测细胞凋亡,U266-MyD88细胞早期凋亡、晚期凋亡及总体凋亡均高于对照组,分别为(4.19%VS 2.61%,P=0.022)、(0.815%VS 0.31%,P<0.001)、(5.005%VS 2.92%,P=0.006)。结论:1)MyD88是多发性骨髓瘤细胞生长的重要分子。干扰MyD88可以抑制骨髓瘤细胞系增殖,促进其凋亡;过表达MyD88可激活NF-k B通路,引起IL-6、MCP-1、TGF-β、TNF-α、VEGF细胞因子表达上调,促进骨髓瘤细胞系增殖;2)MyD88高表达水平对于硼替佐米治疗更为敏感,使用硼替佐米抑制NF-k B通路,可以促进MyD88过表达稳定细胞株凋亡。该研究可为进一步理解MM的发病机制,开发新的靶向药物提供理论和实验基础。