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为了阐明腐植酸的最佳提取条件及其作为绿色饲料添加剂的安全性,本试验研究了褐煤中腐植酸的提取条件及用昆明种小白鼠对提取的腐植酸进行了较系统的毒理学试验,毒理学试验包括急性毒性试验、蓄积毒性试验、亚慢性毒性试验、传统致畸试验与致突变试验。除急性毒性试验以外,试验组均是在常规饲料的基础上分别添加1%、3%、5%的腐植酸,另设阴性对照组。提取试验结果表明,25%的硝酸作用40分钟后,在55℃下用浓度为2.25%的NaOH:Na2CO3=1:1的混合溶液溶解60min,腐植酸的提取率最高,为67.2%。急性毒性试验结果表明,LD50>28320mg/Kg。说明褐煤中提取腐植酸属于实际无毒类物质；未见动物有异常现象和死亡,说明蓄积毒性试验结果表明褐煤中提取腐植酸无蓄积毒性作用。亚慢性毒性试验结果,在90天喂养试验中,在给药后三个月后对小白鼠进行了常规指标、血液指标、脏器系数以及心、肝、脾、肺、肾的病理组织学检查,试验结果表明各项试验均无显著变化,结果表明褐煤中提取腐植酸实属无毒性物质。在喂养繁殖试验中,对小白鼠的受孕率、妊娠率、孕鼠的体重、出生存活率、哺育存活率等进行了测定,并在喂养期间,对小白鼠进行定期捕杀,进行血液学指标和生化指标测定,捕杀的小白鼠全部进行肉眼病理学检查,并取出主要脏器进行称重,计算脏器系数,同时对脏器进行组织学检查,结果表明：褐煤中提取的腐植酸作为饲料添加剂饲喂小白鼠1%、3%无母体毒性和胚胎毒性,5%的腐植酸具有母体毒性和胚胎毒性。在传统致畸试验中,对所有孕鼠的着床数,活胎数,死胎数、吸收胎数、胎鼠体重、身长、尾长、颜色、形状、大小、数量以及胎鼠的内脏和骨骼进行了检查,结果表明：饲喂5%的腐植酸钠对胎鼠骨骼和内脏检查试验中存在致畸作用,1%、3%的腐植酸对胎鼠骨骼和内脏检查试验中无致畸作用。致突变试验结果,小白鼠的微核、精子畸形呈阴性反应,这说明褐煤中提取的腐植酸无致突变作用。综合以上结果,表明褐煤中提取的腐植酸,按1%、3%的量添加无毒性,作为饲料添加剂饲喂是安全的,按5%的量添加具有母体毒性、胚胎毒性及在胎鼠骨骼和内脏检查试验中存在致畸作用,不能作为饲料添加剂使用。