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目的:结肠癌(Colon Cancer)是常见的消化道恶性肿瘤之一,它的发病率和死亡率呈逐年上升趋势,在西方国家,结肠癌的发病率位于世界第二位,而在我国,它的发生率和死亡率则位于第四位,目前结肠癌在其早期诊断、早期治疗方面取得了一定的成效,但其预后及5年生存率仍很低。本研究通过观察miR-139-5p的表达对结肠癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、侵袭和迁移的影响,初步探讨miR-139-5p在结肠癌发展过程中的作用,为结肠癌的早期筛查、基因的靶向治疗以及预后提供理论依据。方法:通过RT-PCR (Real-time Polymerase Chain Reaction)分析了95对结肠癌和癌旁正常组织以及所有的7种人类结肠癌细胞中miR-139-5p的表达水平;采用瞬时转染的方法,将pre-miR-139-5p和pre-miR-Ctrl分别转染到结肠癌细胞株中,RT-PCR (Real-time Polymerase Chain Reaction)检测其转染效率;MTT法绘制出细胞生长曲线,Transwell法检测细胞的侵袭和迁移能力,流式细胞仪对转染的结肠癌细胞株进行凋亡和细胞周期分析;最后通过Western Blot和PCR的方法验证了与细胞侵袭、迁移及细胞凋亡相关基因的表达情况。采用T-T test方法对分别转染niR-139-5p和rniR-Ctrl的结肠癌细胞的增殖、侵袭、转移、凋亡、及细胞周期方面进行检验和分析。结果:1.通过实时定量PCR分析得出,与癌旁正常组织相比,miR-139-5p在结肠癌组织中表达是明显降低的(P<0.0001), miR-139-5p的表达下调与结肠癌的远处转移存在着明显的关联(P=0.031)。同时与正常结肠细胞相比,在人类的7种结肠癌细胞中miR-139-5p的表达沉默或者减少。这些揭示了miR-139-5p在结肠癌中可能是一个潜在的肿瘤抑制因子。2.细胞生物学功能方面,通过细胞活力测定(MTT)和集落形成实验,miR-139-5p在结肠癌细胞株(DLD1, HCT116, SW1116)中的表达可以明显抑制结肠癌细胞的生长(P<0.0001,P=0.0002,P=0.0022)和集落的形成(P<0.05)。明显抑制结肠癌细胞的生长(P<0.0001,P=0.0002,P=0.0022)和集落的形成(P<0.05)。3.此外,miR-139-5p在DLD1和SW1116中的表达可以抑制细胞的侵袭(P=0.0006,P=0.013)和迁移能力(P<0.0001),抑制基因VIM(SW1116,P=0.0088), MMP1(DLD1,P=0.0088), MMP7(DLD1P=0.0035, SW1116P=0.0031)和MMP9的表达。4. miR-139-5p能够诱导结肠癌细胞DLD1和HCT116的凋亡(P<0.05),上调重要的凋亡相关基因cleaved caspase-8和PARP。同时,miR-139-5p能够引起结肠癌细胞周期G0/G1期阻滞(DLD1,HCT116),通过它可以促进G0/G1期重要的调控因子p21和p27的表达而得到证实(DLD1P=0.0082, P=0.0036, HCT116P=0.025)。结论:1.miR-139-5p在结肠癌组织和结肠癌细胞中的表达明显下调。2. miR-139-5p通过抑制细胞增殖、促进细胞凋亡等过程发挥类似抑癌作用;它通过调节细胞周期重要调控因子P21和P27的水平阻滞细胞周期;通过Caspase途径诱导细胞凋亡;通过调控基质金属蛋白酶,影响细胞迁移和侵袭。3. miR-139-5p是一种新发现的在结肠癌的发生和发展中发挥着重要作用的MicroRNA,它可以抑制结肠癌细胞的增殖,细胞侵袭与转移,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。因此,miR-139-5p在结肠癌的发生和发展中可能发挥着抑癌的作用。