论文部分内容阅读
从我们的大规模cDNA克隆和测序计划中,利用表达谱基因芯片筛选的结果并通过生物信息学分析,我们选取了2条基因进行进一步的研究,以探讨这些基因的功能。外界刺激通过细胞内的蛋白激酶反应链,将信号从细胞膜传导到核,导致相关转录因子的磷酸化和被激活,从而引起基因表达的变化。cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element binding protein,CREB)也许是其中最具特点的刺激诱导转录因子我们实验室克隆了一个人类CREB的新基因(CREB4),该基因编码一个395个氨基酸的蛋白,并与小鼠的CREB3高度同源。RT-PCR显示CREB4在胰腺、前列腺、脑和骨骼肌组织中表达,在小肠、外周血白细胞、睾丸和胸腺组织中低表达,而在成人胎盘、心脏、脾脏、卵巢、肾脏、肝脏、肺和结肠组织中未检测到特异性条带,在检测的各肿瘤组织中显示CREB4基因只在结肠癌 (CX-1和GI-112)、肺癌(LX-1)、前列腺癌(PC-3)和胰腺癌(GI-103)有表达,而在乳腺癌(GI-101)、卵巢癌组织(GI-102)和肺癌组织(GI-117)中未测到特异性条带。通过生物信息学将CREB4定位于人染色体1q21.3。表达谱芯片结果显示CREB4基因在肝癌组织上调。GFP荧光定位显示全长CREB4定位与细胞质内,而去C端的突变体定位与细胞核。采用酵母双杂交系统以寻找与CREB4相互作用的蛋白。我们发现CREB4可以与核孔复合物相关蛋白TPR及kayopherinα2相互作用,而这两个蛋白都与蛋白质的核转运有关,推测CREB4可能通过它们进入细胞核。蛋白4.1是红细胞中以血影蛋白(spectrin)为基础的细胞膜骨架的一个基本成分,在维持红细胞质膜的形态和机械性能方面起着至关重要的作用。我们克隆了一个新的蛋白4.1基因(4.1O)。该基因全长2312bp,编码一个553氨基酸的蛋白。RT-PCR显示4.1O只在 卵巢组织中检测到特异性条带,在胎胸腺组织和胎脑组织中低表达。生物信息学分析显示4.1O含有14个外显子和13个内含子,定位于人染色体9q21-9q22区段上。表达谱芯片结果提示4.1O基因在肝癌组织和胃癌组织中表达上调。