载STEAP-1及VEGFR-2抗体前列腺癌靶向超声微泡的制备及寻靶实验研究

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目的:使用前列腺跨膜上皮抗原-1(STEAP-1)抗体及血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)抗体作为配体,采用生物素-亲和素法制备携带上述抗体的新型靶向超声微泡造影剂,并探讨其体外寻靶能力,分析所制备造影剂在荷人前列腺癌裸鼠增强显影效果,希望获得有价值的早期超声诊断方法。方法:(1)采用生物素-亲和素方法制备靶向超声造影剂,将STEAP-1抗体及VEGFR-2抗体与普通超声造影剂进行结合,并在荧光显微镜下观察微泡荧光情况,并通过流式细胞仪检测其结合率及稳定性。(2)在无菌环境下体外培养人前列腺癌细胞株PC3并传代,在雄性裸鼠皮下接种PC3细胞,建立荷人前列腺癌移植瘤雄性裸鼠模型。通过荷瘤裸鼠模型尾静脉注射靶向超声微泡造影剂及普通超声造影剂进行超声增强显影,观察裸鼠移植瘤的造影剂分布特征及实时灌注情况,并用相关软件绘制时间-强度曲线进行定量分析,比较不同造影剂的达峰时间(Time to Peak,TTP)、峰值强度(Peak Intensity,PI)及平均渡越时间(Mean Transit Time,MTT)。结果:(1)携带STEAP-1抗体及VEGFR-2抗体的靶向微泡超声造影剂通过免疫荧光实验在荧光显微镜下均呈阳性表达,即微泡边缘出现绿色荧光。(2)成功建立荷人前列腺癌裸鼠模型,通过鼠尾静脉注射普通超声造影剂及两种靶向造影剂,所有组别均可见明显增强,达到一定峰值后逐渐减弱。结论:(1)采用生物素-亲和素法可以成功制备携带STEAP-1抗体及VEGFR-2抗体的靶向超声造影剂,且两种靶向超声造影剂性质均较稳定;(2)在体外实验中,携带STEAP-1抗体及VEGFR-2抗体的靶向超声造影剂在荷瘤裸鼠中靶向性较好且特异性较高,其中VEGFR-2抗体可以与前列腺癌新生血管内皮细胞特异性结合,为评估前列腺癌新生血管形成提供了新的思路。
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