人源Pelota的结构生物学研究

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Pelota蛋白是一种在进化上是非常保守的RNA结合蛋白。在古细菌、酵母、果绳、小鼠以及人类中,都有pelota蛋白。人类的pelota和其他生物相比,和小鼠的同源性最高(达到95%)。它是由三个结构域组成的,所有的pelota蛋白都含有一个保守的核定位信号(PRKRK)以及一个位于C端的eEF1α类似结构域。Pelota蛋白参与细胞周期的调控,影响生殖细胞的形成,从而引发不与不育症;pelota蛋白也参与蛋白的翻译过程的调控,保证蛋白正确地翻译;pelota在mRNA的监控机制中也起到重要的作用,对核糖体的循环利用也起到很重要的作用。总之,pelota在进化上的保守性,功能也有保守性;但在进化中,pelota已经出现了新的功能,甚至人源的pelota可以作为药物靶点来寻找治愈某些疾病的新药物。不同于以往人类pelota蛋白的研究,本论文采用结构生物学方法研究pelota,期望从结构生物学的角度讲解pelota通过与其他物质相互作用在细胞周期发挥的作用机制,为一些疾病的研究和其生物学动能研究奠定了基础。本课题采用分子克隆技术,将人源的pelota构建到原核表达载体中。采用原核表达系统,通过改变表达载体、改变基因序列的长度、定点突变、改变表达菌株等条件的优化,得到可溶性的第蛋白,并对其纯化,以期望得到可衍射的晶体。
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