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目的:食管癌是人类较常见的恶性肿瘤之一,它严重威胁着人类的生命和健康。在我国,食管癌死亡率仅次于胃癌居第二位。食管癌死亡率较高的主要因为主要是由于食管癌的早期症状不甚明显,多数患者在确诊时已达癌症的中晚期而延误了最佳治疗时机。
已知淋巴道转移是食管癌最重要的转移途径。伴有淋巴结转移是癌的不利预后因素,食管癌的生存率与肿瘤的转移密切相关。因此,探讨食管癌淋巴道转移机制,对了解肿瘤转移的生物学行为,寻找新的肿瘤治疗切入点等方面有重要的临床意义。
Podoplanin,为肾小球上皮细胞整合膜蛋白。是新发现的特异性淋巴管标志物,是一种与淋巴管生成密切相关而与血管生成无关的黏蛋白。鼠抗人D2-40单克隆抗体可以特异性识别表达于淋巴管内皮上的Podoplanin。用于标记肿瘤组织中的淋巴管内皮,具有较高的敏感性和特异性。VEGF-C(血管内皮生长因子-C,vascular endothelial growthfactor-C,)为血管内皮生长因子(VEGF)家族的一个成员,是近年来新发现的促淋巴管生长因子,可以选择性地引起淋巴管增生,诱导实体瘤内或肿瘤周围的淋巴管生成和/或扩张,促进肿瘤的淋巴结转移。肿瘤转移抑制基因nm23定位于17号染色体的q21.3上,编码核苷二磷酸激酶,是新近发现的一种肿瘤转移抑制基因,在大多数恶性肿瘤中nm23低水平表达者易发生转移。现有研究表明,nm23基因表达率的降低与食管癌的转移有一定的关系,且nm23基因的阳性表达与食管癌患者的预后密切相关,nm23基因表达阴性的病人的存活率明显低于表达阳性的病人,但nm23与淋巴结转移的关系不清,因此nm23在食管癌中的作用仍需进一步探讨。
本实验通过检测nm23、VEGF-C和Podoplanin在食管鳞癌组织及正常食管组织中的表达,探讨nm23、VEGF-C和Podoplanin与食管癌淋巴管生成和淋巴结转移的关系。
方法:应用免疫组织化学SP法,DAB显色。检测74例食管鳞癌及其切缘正常组织中nm23、VEGF-C和Podoplanin的表达水平,并分析其与食管癌患者年龄、性别；组织分化、淋巴结转移及浸润深度等临床病理各因素的关系。
nm23结果判定:nm23蛋白为在细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞,阳性细胞数<20％为阴性,阳性细胞数≥20％阳性。
VEGF-C结果判定:VEGF-C定位于细胞浆,胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性,阳性细胞数<10％为阴性,阳性细胞数≥10％为阳性。
Podoplanin淋巴管密度(LVD)的判定方法:参照Kenney等的报道方法,先在低倍(10x)视野下选取肿瘤中淋巴管最密集的区域,再在高倍(40x)视野下计数Podoplanin染色阳性的淋巴管数,每例读数3个视野,并求其平均值作为LVD。
统计方法
采用SPSS13.0统计学软件,计量资料采用t检验,计数资料采用X2检验,以p<0.05为差异具有统计学意义。
结果:
1 nm23、VEGF-C和Podoplanin在食管鳞癌组织中的表达
(1)nm23在食管鳞癌组织中的表达
食管癌组织中nm23蛋白阳性表达率为71.6％,正常组织中nm23蛋白阳性表达率为87.5％,两组比较差异无统计学意义(p>0.05)。nm23在食管癌组织高、中分化组和低分化组阳性表达率分别为78.6％和50.0％；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组nm23蛋白阳性表达率分别为57.6％和82.9％。在组织分化和有无淋巴结转移组差异有统计学意义(p<0.05),而与年龄、性别及外膜浸润无明显关系(p>0.05)。
(2)VEGF-C在食管鳞癌组织中的表达
食管癌组织中VEGF-C蛋白阳性表达率为58.1％,明显高于食管正常组织中12.5％的表达率；在高、中分化组VEGF-C蛋白阳性表达率66.1％,高于低分化组的33.3％；在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组VEGF-C蛋白表达率分别为72.7％和46.3％。VEGF-C表达与组织分化和有无淋巴结转移明显相关(p<0.05),而与年龄、性别及外膜浸润无明显关系(p>0.05)。
(3)Podoplanin在食管鳞癌组织中的表达
Podoplanin表达于肿瘤和正常组织新生淋巴管内皮,使毛细淋巴管内皮细胞胞浆呈棕黄色。淋巴管密度LVD在正常食管组织和食管癌组织中分别为3.13±1.36、7.65±3.37；在食管癌有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的LVD分别为7.14±3.25和4.23±1.62；食管鳞癌组织中LVD与组织分化和有无淋巴结转移明显相关(p<0.05),与年龄、性别、组织分化及外膜浸润无关(p>0.05)。
2食管鳞状细胞癌组织中nm23和VEGF—C表达与LVD的相关性:
VEGF-C阳性表达的43例食管癌组织中LVD为8.73±2.83,31例VEGF-C阴性表达的食管癌组织中LVD为6.16±3.53； nm23阳性表达的53例食管癌组织中LVD为7.83±3.32,21例nm23阴性表达的食管癌组织中LVD为7.19±3.51。
VEGF-C阳性表达的食管癌组织中LVD与阴性表达的LVD比较差异显著(p=0.001),而nm23阳性表达的食管癌组织中LVD与nm23阴性表达的LVD比较差异无统计学意义(p=0.464)。
3食管癌组织中nm23与VEGF-C表达的相关性
食管癌组织中nm23表达与VEGF-C表达无明显相关性,r=-0.048,p=0.677。
结论:
1 VEGF-C在食管癌表达明显增高,VEGF-C和LVD均与食管癌的组织分化和淋巴结转移明显相关；且VEGF-C和LVD有明显相关性；
2 nm23在食管癌表达与其分化和有无淋巴结转移有相关性,提示nm23与食管癌的组织分化和淋巴结转移有关；但与LVD无关;
3 nm23与VEGF-C在食管癌的发生发展过程中无相关性;
4 VEGF-C和LVD是肿瘤淋巴结转移和淋巴管生成的重要指标。