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恶性肿瘤严重威胁人类的生命健康。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。转移和复发是乳腺癌患者死亡的主要原因。调控肿瘤侵袭转移的能力是肿瘤研究和治疗过程中的重大课题。而肿瘤细胞的侵袭转移离不开细胞运动，因而参与调节细胞运动的相关蛋白及因子的研究成为肿瘤研究的重要方向。非肌细胞肌球蛋白Ⅱ（Nonmuscle Myosin Ⅱ， NMⅡ）作为细胞骨架的重要组成成分，参与调节细胞运动过程，包括细胞极化、粘附和迁移的调节，而肿瘤细胞转移的起始阶段即表现为细胞极性、粘附性和细胞迁移的改变，由此推测NMⅡ可能参与肿瘤转移起始阶段的调节。NMⅡ是由两条重链（NMHC）及两对轻链(NMLC)构成。其中，NMLC起调节和稳定作用， NMHC与肌动蛋白结合调节细胞运动，故NMHC可能是调节细胞运动的直接作用点。NMHCⅡ包含NMHCⅡA，NMHCⅡB和NMHCⅡC三种亚型。我们前期就NMHCⅡB与肿瘤相关性进行了研究，而NMHCⅡB对肿瘤转移的作用尚不明确。本研究通过RNA干扰技术沉默乳腺癌MCF-7细胞中NMHCⅡB的基因，观察NMHCⅡB对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响。目的：应用RNA干扰技术沉默乳腺癌MCF-7细胞的NMHCⅡB基因，检测NMHCⅡB对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：1.脂质体转染法将构建好的3条质粒（质粒2#、质粒3#和质粒5#）和1条空载质粒转入MCF-7细胞中的NMHCⅡB基因，应用荧光显微镜观察转染效率；应用Western Blot和免疫细胞化学染色方法检测转染后NMHCⅡB在细胞中表达情况，并筛选出能够高效抑制NMHCⅡB表达的质粒载体；2.以筛选出的高效干扰质粒沉默NMHCⅡB基因作为RNAi实验组，以空载质粒组和无转染MCF-7细胞组作为对照组。1）用CCK-8试剂盒检测MCF-7细胞存活率；2）通过细胞划痕实验检测RNA干扰后MCF-7细胞迁移能力改变；3）采用Boyden小室试验检测RNA干扰后细胞侵袭能力改变；4）利用细胞免疫细胞化学染色检测RNA干扰后MCF-7细胞MMP-9表达情况；5）并通过免疫荧光染色来检测干扰后MCF-7细胞细胞骨架的变化。由此探讨RNA干扰NMHCⅡB基因对乳腺癌MCF-7细胞存活、迁移和侵袭能力的影响。结果：1.荧光显微镜下观察计数得出转染效率可达80%。2.免疫细胞化学染色和Western Blot方法同时证实质粒2#、质粒3#和质粒5#均可以使NMHCⅡB的表达降低，其中以质粒5#效果最佳。3. CCK-8试剂盒检测细胞存活率结果显示，RNAi组与无转染组和空载质粒组相比细胞存活率没有明显差异。4.细胞划痕实验结果表明，RNAi组细胞迁移率低于无转染组和空载质粒组。5. Boyden小室实验结果显示，RNAi组细胞穿过人工基底膜数量明显少于无转染组和空载质粒组。6.免疫荧光染色结果显示，RNA干扰NMHCⅡB后细胞细胞骨架发生改变，没有清晰的网络状排列结构。7.免疫组化结果显示，RNA干扰NMHCⅡB后细胞MMP-9表达减少。结论：1. NMHCⅡB对MCF-7细胞存活无影响。2. NMHCⅡB可能通过调节细胞骨架结构参与MCF-7细胞迁移运动。3. NMHCⅡB可能通过调节MMP-9的合成和分泌调节侵袭能力。