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瘦素是一种主要由白色脂肪组织分泌的激素,可作用于下丘脑调节能量平衡,维持体重稳定。近年来,越来越多的证据表明瘦素可以通过作用于下丘脑-垂体-性腺轴调节机体的生殖功能。本试验通过培养原代猪卵巢颗粒细胞,研究瘦素诱导的颗粒细胞的增殖与凋亡,以及瘦素刺激下颗粒细胞雌二醇与孕酮的分泌,探讨其作用机制。试验结果包括以下几个部分:1、猪卵巢颗粒细胞的原代培养及鉴定。选取体重为100kg左右的健康母猪卵巢,无菌条件下,用1mL一次性注射器抽取卵泡液,获得颗粒细胞后于37℃饱和湿度的CO2培养箱中培养,FSHR抗体免疫荧光鉴定颗粒细胞的纯度。分离得到的颗粒细胞呈多边形、星状,后期逐渐转变为纤维状;免疫荧光鉴定分离的细胞纯度>98%;绘制颗粒细胞7天内的生长曲线发现细胞在贴壁48h到120h之间都处于增殖上升期,120h后增长呈下降趋势。2、瘦素对颗粒细胞增殖、凋亡及分泌功能的影响。用0、1、10、50、100ng/mL瘦素处理卵巢颗粒细胞,发现细胞培养24h后,不同浓度瘦素均能刺激颗粒细胞的增殖（P<0.05）,培养48h后,仅100ng/mL瘦素能显著促进颗粒细胞的增殖（P<0.05）;细胞凋亡数据显示,10、100ng/mL瘦素显著抑制了颗粒细胞的早期凋亡（P<0.05）,对颗粒细胞的晚期凋亡和总凋亡率无明显作用（P>0.05）;不同浓度的瘦素对调控颗粒细胞E2与P4的分泌无显著影响（P>0.05）。3、实时荧光定量PCR检测ob-Rb、pi3k/akt信号通路中pi3k、akt1、akt2的mRNA表达以及细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax、Bad、Caspase-3的mRNA表达量。结果显示,与对照组相比,1、50ng/mL瘦素处理组显著提高了ob-Rb的mRNA表达（P<0.05）;10、50ng/mL瘦素显著上调了pi3k/akt信号通路中pi3k的mRNA表达（P<0.05）;10ng/mL瘦素显著上调了akt1的mRNA表达（P<0.05）;1ng/mL瘦素显著上调了akt2的mRNA表达（P<0.05）。瘦素对颗粒细胞中Bcl-2的表达量无显著影响（P>0.05）;1ng/mL瘦素可提高细胞中Bax的mRNA表达（P<0.05）,其余各组均有降低Bax表达的趋势,但差异不显著（P>0.05）;50ng/mL瘦素可显著提高Bcl-2与Bax的比值（P<0.05）;1ng/mL的瘦素显著上调了Bad的mRNA表达（P<0.05）,10100ng/mL瘦素均可显著下调Bad的mRNA表达（P<0.05）。与对照组相比,10-100ng/mL的瘦素均显著降低了Caspase-3的mRNA表达量（P<0.05）。结论:瘦素能刺激颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,可能是通过作用于pi3k/akt通路调控凋亡因子Bad、Caspase-3的表达,提高Bcl-2/Bax的比值来实现的。