肾素-血管紧张素系统(RAS)是人体内重要的体液调节系统,包括血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)等成分。当肝脏受到酒精等致病因素的刺激时,RAS被激活,导致肝脏的结构和功能受损。具有ACE抑制活性的功能肽(ACE抑制肽)下调RAS的表达量,减轻酒精对肝的损伤程度。食物蛋白源ACE抑制肽来源广泛、无毒副作用、安全性高等特点,具有广泛的应用价值。腰果是海南最具有热带特色的经济作物,具有抑制活性高的ACE抑制肽,为开发预防急性肝炎的食品提供了新思路。目的:拟从腰果中获得ACE抑制肽,探讨其对乙醇诱导小鼠急性肝炎的拮抗作用,旨在拓宽预防急性肝炎的研究途径,并为腰果开发和利用提供实验数据。方法:单因素实验分析料液比、pH、提取时间、提取温度对腰果蛋白提取率的影响,采用响应面分析法确定最佳提取条件;优化腰果蛋白的酶解条件;通过透析、葡聚糖凝胶G-25、反相高效液相色谱(RP-HPLC)等多步分离纯化,以ACE抑制率为评定指标,收集ACE抑制率最高的组分;建立急性肝炎小鼠模型,通过病理学检查、ELISA法、免疫组织化学法、RT-PCR法,对肝脏病理学、肝功能水平、细胞因子水平及ACE-Ang Ⅱ-AT1R轴表达量进行检测。结果:(1)腰果ACE抑制肽分离纯化条件的确定。通过响应面优化实验可知,当pH为11,温度为40℃,浸提时间为1.5 h,料液比为1:40时,腰果蛋白质的提取率最高为87.1±1.05%。经过酶解、透析、多步分离纯化后获得ACE抑制率最高的组分P4-3,ACE抑制率为91.04±0.31%;(2)腰果ACE抑制肽对小鼠肝脏的保护作用。高剂量的腰果ACE抑制肽(800 mg/kg·d)能够使肝细胞的形态、排列得到明显的改善,脂滴含量明显降低(p<0.01),血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平降低(p<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)活性升高(p<0.01),肝匀浆中丙二醛(MDA)水平降低(p<0.05),细胞因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达下调(p<0.01),ACE、AngⅡ、AT1R 表达均下调(p<0.01,p<0.05)。结论:腰果ACE抑制肽(800 mg/kg.d)对酒精诱导的小鼠肝脏损伤有拮抗作用,使肝组织结构、肝功能水平、细胞因子水平等均趋向正常,RAS表达下调。证实了ACE抑制肽通过下调肝组织RAS中ACE-AngⅡ-AT1R轴的表达,从而减轻肝损伤。