论文部分内容阅读
鸡传染性法氏囊病（Infectious bursal disease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）引起的一种急性、致死性传染病。该病毒主要感染3-6周龄雏鸡,靶向中枢免疫器官法氏囊,大量破坏B淋巴细胞,引发严重的炎症反应,进而导致鸡的死亡。耐过鸡表现为严重的免疫抑制,往往会导致其它疫苗的免疫失败,而且对其它疫病的易感性增加。该病严重威胁家禽养殖业的健康发展。VP2蛋白是IBDV的衣壳蛋白,不仅是主要免疫原,也是重要的毒力蛋白,而且在天然免疫中发挥重要作用。所以VP2在IBDV的免疫防控和致病机理研究方面非常关键。然而,可溶性且有活性的病毒衣壳蛋白通常难以制备,这制约了相关研究的发展。Gx株是IBDV超强毒的中国参考毒株,对鸡有高致病性;Gt是源于Gx株的传代致弱毒株,对鸡不致病,可作为疫苗株使用。本研究基于大肠杆菌原核表达系统,经过一系列优化,在冷休克条件下实现了IBDV衣壳蛋白VP2的可溶性表达。进而,集成亲和层析串联凝胶过滤的方法,获得了较高纯度的IBDV强、弱毒衣壳蛋白VP2。所表达的蛋白GxVP2、GtVP2（融合His标签）具有良好活性,均能自组装成IBDV病毒样颗粒（Virus-like particles,VLP）,与IBDV标准阳性血清能够发生特异性免疫反应。GxVP2、GtVP2（融合His标签）均能刺激机体产生良好的免疫应答,诱导产生较高滴度的抗体,对超强毒的攻击能够产生90%的临床保护。与GtVP2组相比,GxVP2组诱生了更高的中和抗体,能够保护法氏囊不萎缩（平均BBIX为0.81）,法氏囊病理学观察仅见散在性的淋巴细胞坏死。超强毒VP2具有作为亚单位疫苗的潜在价值。与VP2互作的宿主蛋白在IBDV的致病和免疫过程中发挥重要作用,然而其亲和力均未被鉴定。本研究利用以“动态记录分子互作过程”为特点的Biacore大分子互作仪,分别研究了IBDV强、弱毒衣壳蛋白VP2与病毒细胞受体组分鸡热激蛋白Hsp90α以及天然免疫重要接头分子酪蛋白激酶CK1α的结合和解离过程,确定和比较了其亲和力。IBDV衣壳蛋白VP2与Hsp90α具有强相互作用(10-8 M),与CK1α具有中等相互作用(10-4 M),强、弱毒VP2与Hsp90α或CK1α的亲和力相当。本研究攻克了病毒衣壳蛋白不易可溶性表达的难题,成功获得了高纯度的IBDV强、弱毒VP2;该蛋白具有自组装活性,超强毒VP2具有更好的免疫活性;分别确定了VP2与病毒细胞受体组分Hsp90α的高亲和力,以及与天然免疫重要接头分子CK1α的中等亲和力。本研究对IBDV免疫防控和致病机理研究有重要意义。