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戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）的开放读码框2（Open reading frame2，ORF2）编码病毒的主要结构蛋白—衣壳蛋白，是病毒与宿主细胞结合的关键部分，可能决定着HEV感染。HEV主要有4个基因型，1型和2型仅感染人，3型和4型既感染人也感染猪等动物。3型和4型被认为是人畜共患病毒，猪是HEV的动物宿主。HEV感染和宿主限制性的分子机制尚不清楚。本课题旨在筛选、验证与HEV ORF2相互作用的蛋白并分析1型和4型ORF2与猪蛋白相互作用的差异，探索宿主蛋白在HEV感染过程中的作用，为研究HEV的感染及跨种属传播机制提供线索。为了研究HEV感染人的机制，本研究筛选、验证人肝脏文库中与ORF2相互作用的蛋白。首先，通过分裂-泛素酵母双杂交系统，以HEV4型ORF2（aa112-660）为诱饵蛋白，对人肝脏cDNA文库进行了三次筛选。通过酵母共转染进行验证，获得了43种可能与ORF2相互作用的蛋白。其次，结合本实验室前期利用1型ORF2筛选人肝脏cDNA文库获得的蛋白，发现在人肝脏文库中有21种蛋白均与1型和4型ORF2相互作用。分析蛋白质的性质、定位、功能后，挑选出15种蛋白采用pull-down进一步验证与ORF2的结合，确定了8种与ORF2相互作用的蛋白，分别为ASGR2、BNIP3、C14orf1、EBP、HMOX2、TMEM134、TMEM14A和TMEM230。最后，采用经典免疫共沉淀技术（co-immunoprecipitation，Co-IP），进一步验证了ORF2与TMEM134的结合作用。同时，为了研究HEV种属限制性的机制，本研究分析了不同基因型ORF2与不同种属宿主蛋白的相互作用：（1）对前期实验在猪肝脏文库中筛选到的仅与4型ORF2结合的蛋白进行了验证，运用pull-down技术比较其与1型、4型ORF2相互作用的差异，发现NNT、MTCH2、STX12和SEC62B4种蛋白均与1型、4型ORF2作用，只有ATL2蛋白与不同基因型ORF2的相互作用存在差异。（2）通过克隆人ATL2基因，比较了人ATL2与1型和4型ORF2作用的差异，发现人、猪ATL2均与4型ORF2作用，而与1型ORF2不作用。ATL2与不同基因型ORF2作用的差异可能与HEV的宿主范围相关。（3）对ASGR2候选蛋白进行了研究，通过克隆猪、鼠ASGR2基因，比较不同种属ASGR2与ORF2作用的差异。结果发现1型、4型ORF2均与人、猪ASGR2作用。总之，本研究筛选出可能与HEV感染相关的的蛋白43种，明确了8种与ORF2作用的蛋白，进一步验证TMEM134与HEV ORF2的作用，推测其可能影响HEV感染。同时，也发现ATL2与不同基因型HEV ORF2的作用不同，这些发现为HEV感染和种属限制性机制的研究提供了思路和方向。