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当归补血汤(Danggui Buxue Tang, DBT)是一味补血益气名方,其中最经典的配比用法记载于李东垣《内外伤辨惑论》,仅由黄芪和当归两味中药以5:1的芪归比组成,主治妇女血虚阳浮发热证。近年来,研究主要针对当归补血汤的药对配伍比例和增效作用,但益气补血的具体有效单体、最佳剂量及其作用机制仍缺乏研究。本研究根据相关药理研究,从黄芪和当归中选择含量较高且具有明确补血作用的成分进行组分配伍。本研究利用血虚小鼠模型,运用统计学方法,对成分组合(Ingredient combination, IC)做药效探讨,并进一步优化设计,确定主成分和辅成分及剂量优化,探讨其作用靶点,揭示当归补血汤的配伍增效机制。研究结果有助于更好地掌握当归补血汤在使用上的准确性和科学性,定量当归补血汤中的有效成分,同时,该配伍研究方法也可以为中药复方的拆分研究提供一定的借鉴意义。 目的: 探讨当归补血汤中抗血虚的有效组分并进行优化设计,确定各组分的最佳配比,并初步验证该方法的有效性和科学性。 方法: ⑴采用化学联合损伤法,即皮下注射乙酰苯肼和腹腔注射环磷酰胺建立小鼠血虚模型;将实验小鼠随机分为8组。用全自动血液分析仪检测给药后小鼠外周血常规,考察初选的成分组合与当归补血汤对血虚小鼠血常规的影响。⑵主辅成分筛选:根据L12(211)正交设计表,将实验小鼠随机分为12组。检测给药后小鼠外周血常规,并以其中红细胞(Red blood cells, RBC)、血红蛋白(Hemoglobin, HGB)为指标,确定IC中的主药;由主药分析结果,根据L8(27)正交设计表,将实验小鼠随机分为8组。检测给药后小鼠外周血常规,并以其中RBC、HGB为指标,确定IC中的辅药。⑶确定最佳剂量和预期药效:由前两步分析结果,根据U6(65)均匀设计表,将实验小鼠随机分为6组。检测给药后小鼠外周血常规,并以其中 RBC、HGB为指标,运用SPSS17.0软件及Excel运算工具,确定各单体的最佳剂量和预期药效。⑷对该拆分研究方法进行验证,将实验小鼠随机分为正常组、模型组、最佳组合组、高剂量煎剂组4组。检测给药后小鼠外周血常规,对比实验结果与预期结果。⑸小鼠采血后立即将其解剖取其免疫器官,计算小鼠的脏器指数,即脏器重量与每10克小鼠体重的比值(mg/10g)。制备小鼠网织红细胞染色涂片。同时取小鼠血清,用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immune sorbent assay, ELISA)法测定小鼠血清中相关的造血因子的含量。 结果: ①初选的成分组合与不同剂量当归补血汤都能提高血虚小鼠血细胞数量,且煎剂的疗效相比成分组合更好。②以RBC为指标,黄芪甲苷、黄芪多糖作用显著;以HGB为指标,当归多糖、黄芪甲苷、黄芪多糖作用显著,故选择三者为造血主药。阿魏酸与芒柄花素之间具有协同作用(p<0.05),定为辅药。③利用SPSS与 Excel运算软件,得出5个有效单体的最佳剂量分别为阿魏酸0.25mg/kg、芒柄花素0.04375mg/kg、黄芪甲苷0.6875mg/kg、当归多糖341mg/kg、黄芪多糖522mg/kg;预期方程为 YRBC=7.574+5.457×10-6×当归多糖×黄芪多糖+2.149×阿魏酸×芒柄花素-0.224×阿魏酸×黄芪甲苷、YHGB=124.852+9.4×10-5×当归多糖×黄芪多糖+44.304×阿魏酸×芒柄花素-13.195×阿魏酸×黄芪甲苷;预期药效为RBC=8.53×1012/L、HGB=139g/L。④最佳组合组的RBC、HGB实验结果分别为8.46×1012/L和138.8g/L,与预期结果相近。⑤与模型组比,最佳组合和高剂量煎剂均能改善血虚小鼠的脾损伤程度(p<0.05);同时通过提高血细胞数量,减少红细胞的破坏和提高血虚小鼠血清中相关造血因子的浓度来减轻血虚症状。 结论: 以统计学方法,证明了多糖、黄芪甲苷,阿魏酸及芒柄花素是当归补血汤中抗血虚的有效成分。成分组合通过提高血细胞数量、减少红细胞破坏、保护免疫器官、提高造血因子水平方面发挥抗血虚中贫血的作用,与DBT煎剂相比疗效更佳。