Ⅰ型糖尿病是一种世界性的疾病。目前,胰岛移植是临床上治疗Ⅰ型糖尿病的有效手段。随着胰岛移植技术的快速发展,器官供体短缺问题进一步加剧,胰岛分离及冷冻保存技术对于胰岛的成功移植至关重要。猪胰岛的形态结构及代谢产物与人胰岛相似,是胰岛研究的理想模型。因此,本试验利用猪胰岛为试验材料进行研究。常用的胰岛分离方法是酶消化分离法,存在冷、热缺血的限制,容易造成胰岛的损伤,操作复杂且成本高,基于这些原因,选择渗透休克分离法被建立,该方法操作简单,成本低,分离的胰岛在纯度及产量具备优势,且不受温度的影响。在本试验中,我们利用DTZ染色、Hoechst 33342和PI双染色、HE染色,胰岛素释放实验以及总RNA的提取等方法进一步探究酶消化分离法与选择渗透休克分离法的优缺点。结果显示,酶消化法分离的胰岛结构完整性遭到破坏,表面粗糙,胰岛内细胞结构清晰,而选择性渗透休克法分离的胰岛表面结构完整,胰岛光滑,胰岛内无正常细胞形态;酶消化分离的胰岛刺激系数显著高于选择渗透休克方法分离的胰岛（1.69±0.05 vs 1.09±0.06,p<0.01）;酶消化分离的胰岛总RNA的浓度及纯度均优于选择渗透休克分离的胰岛,且存在显著性差异;酶消化分离的胰岛冷冻保存后凋亡率显著高于选择渗透休克分离的胰岛（67.83±2.87vs 0）。这些结果表明酶消化法更适合胰岛的分离。海藻糖是一种安全,可靠的天然非渗透性糖类,在自然界中的许多可食用动植物及微生物体内都广泛存在。因此,在胰岛的冷冻保存试验中,我们利用海藻糖作为一种新的冷冻保护剂用于胰岛的冷冻保存,并与传统冷冻保护剂甘油的冷冻保护效果作了比较。首先,检测了不同浓度（0M,0.1 M,0.2 M,0.4 M,0.8 M）海藻糖冷冻保存的胰岛解冻后分泌胰岛素的能力,结果显示,在冷冻保存液中添加0.2 M海藻糖时冷冻保存效果最佳,解冻后胰岛分泌胰岛素的能力最强（0.95±0.03,1.07±0.03,1.19±0.01,0.92±0.03 vs 1.38±0.02,p<0.01）。随后,利用 Hoechst 33342/PI 双染色实验,胰岛素释放实验及RT-qPCR技术将0.2 M的海藻糖与3 M的甘油对胰岛的冷冻保存效果作了比较。结果显示,0.2 M的海藻糖冷冻保存后的胰岛与3 M的甘油冷冻保存后的胰岛相比:凋亡率无显著性差异（31.78±3.53 vs 31.29±2.41）;刺激系数较高且存在显著性差异（1.35±0.02 vs 1.15±0.01,p<0.05）;胰岛素基因（INS）及胰高血糖素基因（GCG）的mRNA相对表达量较高,且存在显著性差异（分别为12.51±0.12倍和42.68±0.11倍,p<0.01）,而抗凋亡基因（Bcl-2）和促凋亡基因（BAX）的mRNA相对表达量的比值没有差异。这些结果说明海藻糖与传统冷冻保护剂丙三醇相比,能有效改善胰岛的存活,功能,及功能基因INS和GCG的mRNA的相对表达量,是一种无毒的可用于猪胰腺胰岛低温保存的潜在的冷冻保护剂。