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肿瘤抗原-线粒体蛋白12(TumorAntigen-MitochondrialProtein12，TAMP12)是本实验室应用SEREX(SerologicalanalysisofrecombinantcDNAexpressionlibrary，SEREX)技术从人卵巢癌cDNA文库筛选得到的一个新的肿瘤相关候选抗原。该基因定位于人染色体9q34.3，含有345bp的开放读码框，编码114个氨基酸，该蛋白含一个跨膜区域，其N端含有线粒体定位序列。前期研究表明某些肿瘤组织的TAMP12基因呈高表达；肿瘤患者体内的TAMP12抗体水平显著高于正常人；干扰TAMP12蛋白的表达能显著促抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞的凋亡。
为揭示TAMP12蛋白的生物学功能和肿瘤发生、发展的关系，本课题首先对不同组织和细胞的TAMP12基因进行克隆后测序，未见TAMP12序列突变。通过构建逆转录病毒载体和真核表达载体分别转染HepG2和SMMC-7721细胞，建立了高表达TAMP12蛋白的肝癌细胞系HepG2-TAMP12和SMMC-7721-TAMP12，明确了TAMP12蛋白主要表达于线粒体，两者共定位指数为0.8-0.9。将SMMC-7721-TAMP12细胞接种于裸鼠腋下，建立了高表达TAMP12的移植瘤模型。与对照组相比，高表达TAMP12的移植瘤生长速度快、瘤体积大和瘤体质量大，电镜观察可见细胞内粗面内质网丰富、核分裂相多见，显示旺盛的细胞代谢和细胞增殖现象。对移植瘤组织进行基因芯片分析，发现一系列与细胞增殖、凋亡和周期有关的基因表达改变。在上调的基因中主要涉及胰岛素样生长因子受体介导的信号转导通路中的蛋白IGF1R、IGF2R、FRAP1和Grb2等，以及与抗凋亡和促进细胞周期相关的基因如BRAF、CDK10和CDK，并通过免疫印迹技术发现组织中抗凋亡蛋白Bcl-xL表达明显增高。
为进一步了解TAMP12的生物学功能，以5-FU为凋亡诱导剂，观察TAMP12对5-FU诱导的细胞凋亡和周期的影响。流式细胞仪检测细胞周期结果表明高表达TAMP12能促进S期DNA合成，明显逆转5-FU导致的G1-S期转换点阻滞，并显示SubG1期细胞比例明显减少。流式细胞仪检测显示高表达TAMP12的SMMC-7721-TAMP12细胞能显著抑制5-FU诱导的细胞凋亡。为了解TAMP12抗凋亡的机制，进一步分析了活性Caspase蛋白的表达。结果表明活性Caspase3、8、9的表达随着5-FU诱导的凋亡比例的升高而增加，但与对照相比TAMP12能降低三者的表达。酶活性检测结果亦显示5-FU诱导SMMC-7721-TAMP12细胞凋亡后，Caspase3、8、9的活性显著低于对照细胞。并且在5-FU处理后TAMP12高表达的细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL的表达增加，而促凋亡蛋白Bax表达减少。采用ROS荧光探针DCF经流式细胞仪检测发现，TAMP12能显著抑制ROS的生成，而ROS作为一种信号分子具有广泛的功能，参与细胞增殖、凋亡，周期的调控。
综上所述，本课题研究结果表明高表达TAMP12细胞(1)上调膜受体表达，如胰岛素样生长因子受体，加速细胞S期DNA.合成，促进细胞增殖。(2)抑制Caspase3、8、9的酶活性，减少活性Caspase3、8、9的蛋白表达。(3)上调抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL表达、下调促凋亡蛋白Bax表达。(4)抑制ROS生成。结果提示TAMP12可通过抑制Caspase活性和ROS生成以抵抗细胞凋亡，有助于细胞增殖。深入研究TAMP12蛋白的生物学功能将为揭示肿瘤发生、发展机制和肿瘤防治开辟新的途径。