【摘 要】
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目的:建立耐顺铂卵巢癌细胞株,并探索耐药细胞的培养条件;观察不同浓度光敏剂DTPP在650nm连续激光下,对耐顺铂卵巢癌细胞的杀伤作用。方法:选用状态良好、呈对数生长的SKOV3细胞,通过采用顺铂大剂量冲击法诱导出耐顺铂的卵巢癌细胞（SKOV3/DDP）,并测定耐药指数;选用耐药性稳定、状态良好且呈对数生长的SKOV-3/DDP细胞,将其分为四组:（1）DTPP-PDT组:用不同浓度DTPP（5、
【基金项目】
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国家自然科学基金“2μm连续波和飞秒脉冲激光辅助下DTPP光敏剂敏化机理及其用于卵巢癌光动力治疗的研究（编号:61775128）”；
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目的:建立耐顺铂卵巢癌细胞株,并探索耐药细胞的培养条件;观察不同浓度光敏剂DTPP在650nm连续激光下,对耐顺铂卵巢癌细胞的杀伤作用。方法:选用状态良好、呈对数生长的SKOV3细胞,通过采用顺铂大剂量冲击法诱导出耐顺铂的卵巢癌细胞（SKOV3/DDP）,并测定耐药指数;选用耐药性稳定、状态良好且呈对数生长的SKOV-3/DDP细胞,将其分为四组:（1）DTPP-PDT组:用不同浓度DTPP（5、10、15、20、25μg/ml）培养后,用激光照射;（2）单纯光敏剂组:不同浓度DTPP（5、10、15、20、25μg/ml）培养,无激光照射;（3）单纯光照组:DTPP 0μg/ml,用激光照射;（4）空白对照组:DTPP 0μg/ml,无激光照射。用MTT法分别测定各组SKOV3/DDP细胞存活率;然后选用合适的DTPP浓度,在激光照射后的不同时间（0、30、60、120、180min）,用Annexinv/PI双染色法测定不同时期SKOV3/DDP细胞凋亡率。结果:采用顺铂大剂量冲击法可获得耐药性稳定的SKOV3/DDP细胞,且其在含低浓度顺铂的培养基中生长状态良好,耐药性稳定。在DTPP-PDT作用后,用MTT法检测SKOV3/DDP细胞存活率,用单因素方差分析得出:（1）单纯光敏剂、单纯光照对细胞存活率无明显影响;（2）DTPP-PDT对SKOV3/DDP细胞有杀伤作用,且随着DTPP浓度的增加而增强。在PDT后的不同时间,采用流式细胞技术检测细胞的凋亡率,用重复测量方差分析得出:细胞凋亡率随PDT后时间的延长而增加。结论:通过顺铂大剂量冲击法获得的SKOV3/DDP细胞生长状态良好,耐药性稳定;DTPP-PDT对SKOV3/DDP细胞有杀伤作用,且在一定范围内杀伤效应与DTPP的浓度成依赖性,细胞以晚期凋亡为主。
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