【摘 要】
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【背景及目的】动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)以血管内膜下形成斑块为主要特征,继发性病变包括斑块内出血、斑块破裂和局部血栓形成,继而可能引发多种其他突发性心脑血管疾病。动脉壁巨噬细胞(Macrophages,MΦ)脂质代谢紊乱导致的脂质蓄积和慢性炎症在AS的发生发展中发挥关键作用。尽管在理解AS的发病机制和降低病死率方面取得了相当大的进展,但疾病的后果和损伤仍然是不利且不可逆的
【基金项目】
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湖南省教育厅重点项目(20A427);
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【背景及目的】动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)以血管内膜下形成斑块为主要特征,继发性病变包括斑块内出血、斑块破裂和局部血栓形成,继而可能引发多种其他突发性心脑血管疾病。动脉壁巨噬细胞(Macrophages,MΦ)脂质代谢紊乱导致的脂质蓄积和慢性炎症在AS的发生发展中发挥关键作用。尽管在理解AS的发病机制和降低病死率方面取得了相当大的进展,但疾病的后果和损伤仍然是不利且不可逆的。因此,寻找新的临床生物标志物并研究其在AS中的调控机制具有重要意义。多项临床试验研究表明,C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(C1q/tumor necrosis factor-related protein 3,CTRP3)是一种有益的脂肪因子,较低的CTRP3水平与糖脂代谢紊乱以及AS等多种心血管疾病存在联系,但CTRP3在AS中的作用及其机制尚不清楚。因此,本研究旨在探究CTRP3对MΦ脂质蓄积和体内AS斑块形成的影响及其机制。【方法】1.酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养基中和apoE-/-小鼠血清中CTRP3浓度;2.实时定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测THP-1源性MΦ中CTRP3及miR-186-5p水平;3.蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)检测THP-1源性MΦ中CTRP3、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporters A1,ABCA1)、ABCG1、肝X受体α(Liver X receptorα,LXRα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)、蛋白激酶Cα(Protein kinase Cα,PKCα)蛋白表达水平;4.油红O(Oil Red O,ORO)染色检测THP-1源性MΦ中的脂滴以及apoE-/-小鼠主动脉斑块;5.酶标法检测THP-1源性MΦ及apoE-/-小鼠血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、游离胆固醇(Free cholesterol,FC)含量以及胆固醇流出率;6.使用PKCα小干扰RNA(PKCαsiRNA)干扰THP-1源性MΦ中PKCα蛋白的表达,并通过WB检测其干扰效率;7.采用荧光素酶报告基因分析miR-186-5p与PKCαmRNA结合情况;8.HE、ORO和Masson染色检测apoE-/-小鼠主动脉根部三尖瓣区域的斑块。【结果】1.THP-1 MΦ源性泡沫细胞CTRP3表达水平显著下降,所以我们用慢病毒转染过表达CTRP3。CTRP3的过表达显著减少THP-1源性MΦ中的脂滴,降低TC和FC含量,增加胆固醇流出率。2.CTRP3过表达显著增加THP-1源性MΦ中PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1蛋白表达水平。3.LV-CTRP3的转染增加THP-1源性MΦ中PKCα的表达,而PKCαsiRNA的处理抑制CTRP3降低胞内脂质蓄积的效应。4.PKCαsiRNA抑制CTRP3激活ABCA1/ABCG1胆固醇流出通路的效应。5.生物信息学和荧光素酶报告试验显示PKCα是miR-186-5p的靶基因。THP-1 MΦ源性泡沫细胞中miR-186-5p水平显著增加,而CTRP3过表达显著降低胞内miR-186-5p水平。miR-186-5p mimic的处理抑制CTRP3增加THP-1源性MΦ中PKCα表达的作用,抑制CTRP3增加胆固醇流出、降低脂质蓄积的效应。6.miR-186-5p抑制CTRP3激活PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1通路的效应。7.CTRP3过表达显著降低高脂饮食apoE-/-小鼠血清TC浓度,减轻主动脉弓和分支处AS斑块形成。【结论】CTRP3通过抑制miR-186-5p/PKCα通路激活THP-1 MΦ源性泡沫细胞PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1胆固醇流出通路,抑制脂质蓄积,减轻AS。
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