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目的:通过建立大鼠角膜碱烧伤模型,研究多西环素对大鼠角膜碱烧伤组织中转化生长因子-β1(Transforming growth factor-betal,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和核因子-κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达的影响,初步探索多西环素抑制角膜疤痕的机制,为角膜碱烧伤的治疗提供新思路。方法:(1)确定多西环素作用于大鼠碱烧伤角膜的最佳浓度:建立SD大鼠右眼角膜碱烧伤模型,随机分为三组,对照组、0.5g·L-1多西环素组和1.Og·L-1多西环素组,每组24只。碱烧伤模型建立后三组分别每天给予20μL眼液溶媒、0.5g·L-1多西环素滴眼液和1.Og·L-1多西环素滴眼液滴右眼,眼液溶媒除了不含多西环素其余成分与多西环素滴眼液相同。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天每组各取8只用显微镜观察进行角膜混浊程度的评分,并拍照;之后麻醉处死大鼠迅速取下碱烧伤侧角膜组织,将角膜一分为二,两份均放入-80℃冰箱中保存备用。其中一份用于实时荧光定量PCR(Real-time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法检测角膜组织中 TGF-β1和MMP-9 mRNA的相对表达情况;另一份用于酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法检测角膜组织中 TGF-β1和MMP-9蛋白的相对表达情况。(2)取SD大鼠40只,随机分成实验组和对照组,每组18只。使用自制模具建立大鼠角膜碱烧伤模型,实验组使用1.Og·L-1多西环素滴眼液滴眼,对照组使用眼液溶媒滴眼,眼液溶媒除了不含多西环素其余成分与多西环素滴眼液相同。于碱烧伤后第3天、第7天、第14天裂隙灯下观察角膜情况,用1%荧光素钠试纸染色评估角膜损伤程度,并拍照。每组取6只麻醉处死大鼠,迅速取下角膜组织,运用蛋白质印迹(Western Blot,WB)法测定角膜组织中TGF-β1、a-SMA和NF-κB的表达水平,运用免疫荧光法检测a-SMA的表达水平及其分布情况。结果:(1)①角膜混浊程度评分角膜碱烧伤后第3天:各组角膜基质明显水肿混浊,角膜上皮缺损,虹膜纹理不清;角膜碱烧伤后第7天:对照组角膜混浊,隐约可见瞳孔;角膜碱烧伤后第14天:对照组可见新生血管长入混浊区,不见瞳孔。与对照组相比[(3.50±0.53)分、(3.25±0.46)分],碱烧伤后第7天、第14天,0.5g·L-1多西环素组[(2.80±0.45)分、(2.20±0.45)分]和 1.Og·L-1 多西环素组[(2.00±0.00)分、(0.60±0.55)分]角膜混浊程度评分降低,且1.Og·L-1多西环素组更低。②PCR结果角膜碱烧伤后第 3 天、第 7 天、第 14 天,0.5g·L-1(0.58±0.07,0.66±0.03,0.60±0.07)、1.Og·L-1 多西环素组(0.38±0.05,0.46±0.05,0.46±0.05)TGF-β1 mRNA 相对表达量均低于对照组(1.01±0.16,1.02±0.22,1.01±0.17),且 1.Og.L-1 多西环素组更低;碱烧伤后第3天、第7天,0.5g·L-1(0.40±0.03,0.63±0.04)、1.Og·L-1 多西环素组(0.28±0.03,0.4 1±0.09)MMP-9 mRNA 相对表达量均低于对照组(1.00±0.12,1.02±0.23),且1.Og·L-1多西环素组更低。③ELISA结果碱烧伤后第3天、第7天、第14天,0.5g·L-1[(86.37±3.25)pg/ml、(88.42±2.94)pg/ml、(84.82±2.97)pg/ml]、1.Og·L-1 多西环素组[(71.18±1.88)pg/ml、(78.13±4.23 pg/ml)、(71.08±3.59)pg/ml]TGF-β1 蛋白相对表达量均低于对照组[(113.37±5.81)pg/ml、(120.80±5.67)pg/ml、(103.46±2.75)pg/ml],且1.0g·L-1多西环素组更低;碱烧伤后第3天、第7天,0.5g·L-1[(580.53±54.14)pg/ml、(971.79±87.1)pg/ml]、1.Og·L-1多西环素组[(420.18±46.36)pg/ml、(767.63±35.01)pg/ml]MMP-9 蛋白相对表达量均低于对照组[(993.27±26.96)pg/ml、(1217.42±25.05)pg/ml],且 1.Og·L-1多西环素组更低。(2)①角膜损伤程度角膜荧光素钠染色结果显示,碱烧伤后第7天和第14天,实验组的角膜着色面积[(19±5.8)%、(2.0±0.5)%]明显小于对照组[(28±7.3)%、(16±5.3)%]。②免疫荧光结果角膜碱烧伤后第第3天、第7天、第14天,实验组表达的红色荧光少于对照组,即实验组中a-SMA的免疫荧光染色比对照组弱。③WB结果碱烧伤后第3天、第7天和第14天,实验组中TGF-β1、a-SMA和NF-κB的表达下调。结论:(1)多西环素作用于碱烧伤大鼠角膜可下调TGF-β1和MMP-9的表达,促进角膜愈合,并呈一定程度的剂量依赖性,且1.Og·L-1多西环素为最佳浓度。(2)多西环素可能通过NF-κB信号通路减少TGF-β1诱导的肌成纤维细胞的形成,从而减少角膜疤痕。