表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）是由前体proEGF分解而成的，表皮和细胞的功能可被其改变，具有促进细胞生殖、分化和治愈伤口创伤等特性，目前EGF主要被用于滋润皮肤和修复创伤等研究。本实验主要研究家蚕EGF基因cDNA的克隆、转录变化及和蛋白重组表达情况。　　本实验根据与家蚕EGF基因相关的公共数据库的序列信息，设计了专一性引物，经克隆和测序获得一段家蚕BmEGF基因的cDNA序列，可知BmEGF基因ORF654 bp，有217个氨基酸被编码，利用相关生物信息学软件分析了其分子特征，且邻接法构建的系统进化树显示家蚕与黑脉金斑蝶亲缘关系最近，与果蝇亲缘关系稍微近一些，而与线虫动物中猪鞭虫和旋毛虫的亲缘关系距离较远。　　家蚕中不同龄期和不同组织的总RNA被提取，而后以M-MLV反转录酶合成第一链cDNA，以家蚕18S rRNA基因做为内参基因，进行了qRT-PCR。结果表明BmEGF基因在组织中表达量呈现不同程度的变化，但BmEGF基因在不同时期和不同组织中的表达是有差异的。在蚕卵催青胚胎发育过程中，BmEGF均有表达并且催青第9d表达量较高；BmEGF在幼虫发育过程中的各龄期蜕皮阶段都有表达，4次蜕皮BmEGF表达量均在眠期最高，各龄将眠相对眠起来说表达量高些，在幼虫5龄7 d，BmEGF基因在表皮和中肠中的表达量最高，在丝腺中的表达量次之，在精巢和卵巢中的表达量较低；在蛹-蛾变态发育时期，上蔟3d至4d刚化蛹，BmEGF基因表达量上调；化蛹6d复眼变黑，BmEGF在脂肪体中表达量较高；化蛾当天BmEGF在精巢和卵巢中表达量较高。　　使用NPV﹑白僵菌﹑大肠杆菌﹑藤黄微球菌四种微生物诱导处理家蚕幼虫，利用real-time PCR技术以家蚕18S rRNA为内参基因检测表皮中BmEGF的转录情况。结果表明在家蚕H95龄3 d幼虫的表皮中，BmEGF基因表达量随着时间的延长呈现先上调后降低的变化；经大肠杆菌诱导处理后的表皮中BmEGF转录水平在3h达到峰值，其他三种菌则是在6h达到峰值；在这四种菌中，BmEGF对大肠杆菌的侵染较为敏感，对NPV侵染响应应答较慢，表明BmEGF在病原微生物处理后的家蚕幼虫的免疫过程，可能起到一定的抗性作用。　　将已测定的ORF片段与pET-28a(+)表达载体连接构建重组质粒，并通过加入不同浓度的IPTG诱导其原核表达，SDS-PAGE电泳和Western blot均证明BmEGF的目的蛋白在E.coli Transetta(DE3)菌株中被诱导表达成功。且高浓度的IPTG有助于目的蛋白的表达，这为以后进一步研究BmEGF蛋白的原核表达及其功能提供了依据。