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目的:本研究通过HUC-MSCs细胞与舌鳞癌(tongue squamous cells carcinoma,TSCC)细胞Cal-27共培养、CCK-8试剂盒测细胞增殖实验、Western blot法,探讨体外环境下HUC-MSCs对舌鳞癌Cal-27生长作用的影响,从而为口腔TSCC的治疗提供一种新的思路。方法:1.Transwell细胞共培养取对数生长期的HUC-MSCs和Cal-27制备细胞悬液并计数,调整细胞浓度为6×105个/ml。选择孔径为0.4um的聚碳酸酯滤膜的tannswell小室置于6孔培养板,将Cal-27细胞放入上室。培养72h后终止,甲醇固定,结晶紫染色,拍照观察细胞数量。2.条件培养基的制备当HUC-MSCs细胞长至80%以上融合时,加入无胎牛血清的单纯MSCM培养基于相同的培养条件下继续培养,24h后用无菌吸管吸取上层培养基至无菌离心管中,取离心后上清液,经孔径0.22um无菌滤器滤过,-80℃保存备用。3.CCK-8细胞增殖实验实验将Cal-27细胞与不同浓度的HUC-MSCs条件培养基共培养72h,CCK-8检测HUC-MSCs上清对Cal-27细胞增殖的作用。将5×103个Cal-27细胞接种于96孔板中(100ul/孔),待细胞贴壁后,分别加入5%、10%、20%、40%、60%的HUC-MSCs条件培养基,设未加条件培养基的Cal-27细胞为对照组,共培养72h后,用酶标仪测定450nm波长处的吸光度(OD)值。4.Western blot法将Cal-27细胞接种于6孔板中,待细胞铺满80%以上时,实验组更换为60%条件培养基培养Cal-27细胞,对照组仍为DMEM高糖培养基,于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养72h后,提取Cal-27细胞总蛋白,Western blot法检测两组bcl-2、PARP-1、β-catenin、c-Myc的表达差异,最后行统计学分析。结果:1.经实验发现,经结晶紫染色后发现,共培养组中小室Cal-27细胞明显少于对照组中Cal-27细胞的数量。2.当加入5%、10%、20%、40%、60%的HUC-MSCs条件培养基后,HUC-MSCs对Cal-27细胞的抑制率分别为5.35%±1.76%、10.99%±2.91%、17.20%±1.75、24.52%±2.95%、40.70%±1.01%,与对照组相比,差异有统计学意义(P﹤0.001)。3.60%HUC-MSCs条件培养基作用Cal-27细胞72h后,凋亡相关蛋白PARP-1的表达明显上调,抗凋亡标志蛋白Bcl-2蛋白的表达明显受抑制,发现β-catenin、c-Myc均表达明显下调,具有极其显著的差异(P﹤0.001)。结论:1.HUC-MSCs对舌鳞癌Cal-27的生长有抑制作用,推测可能是HUC-MSCs分泌某种因子对Cal-27的生长有影响。2.HUC-MSCs条件培养基可抑制舌鳞癌Cal-27的增殖。3.经HUC-MSCs条件培养基的作用,舌鳞癌Cal-27中凋亡蛋白PARP-1、Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达有意义,表明HUC-MSCs条件培养基可促使Cal-27凋亡,推测这可能与Cal-27中Wnt/β-catenin信号通路被抑制有关。