渐狭蜡蚧菌(Lecanicillium attenuatum)是一种地理分布和寄主范围广泛的重要昆虫病原真菌,应用前景广阔。20世纪80年代中后期,蜡蚧菌属的商业制剂相继问世,主要用于防治蚜虫和粉虱。而我国对该菌属的研究相对较晚,20世纪80年代以后国内对该菌属的报道才逐渐增多。本研究对从重庆地区柑橘粉虱上分离得到的渐狭蜡蚧菌TN002菌株的液固双相发酵各阶段生长条件进行了探究,以期为TN002菌株商业化生产提供理论依据。研究内容和结果主要有以下几个方面:(1)渐狭蜡蚧菌TN002菌株的生物学特性研究以菌落直径和产孢量为检测指标设计单因素实验对渐狭蜡蚧菌TN002菌株进行生物学特性研究。结果表明,渐狭蜡蚧菌TN002菌株PDA平板上培养10天菌落直径可达32.33 mm。菌落正面观为圆形,白色。菌丝呈放射状生长,后逐渐增高加厚隆起。菌落背面成奶油黄色。分生孢子椭圆形或卵圆形,单孢、透明。气生菌丝均呈匍匐状。分生孢子梗单生或轮状排列于匍匐菌丝上。该菌最适生长培养基为葡萄糖酵母浸粉琼脂培养基(PJA)和沙氏酵母浸粉琼脂培养基(SDAY),最适产孢培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)。该菌在10~35℃均能生长,最适生长产孢温度为25℃。不同pH对其生长影响差异不显著,在pH为5.5时产孢量最大。在对碳源的利用上,D-麦芽糖最利于其生长,蔗糖、葡萄糖、半乳糖最利于其产孢。酵母浸粉为氮源时菌落生长最好,蛋白胨为氮源时产孢量最大。微量元素Cu、Mn、Zn在50μg/mL的浓度下不利于其生长产孢。维生素盐酸噻胺(VB1)、核黄素(VB2)、叶酸(VM)、盐酸吡哆醇(VB6)在10μg/mL的浓度下均促进其产孢,其中叶酸最利于其生长。渐狭蜡蚧菌TN002菌株对紫外线照射有一定的抗性,但总体来说较为敏感。对高温处理抗性较强,40℃处理1 h仍可保持70%以上的孢子萌发率。对柑橘全爪螨的毒力测定结果显示:该菌对柑橘全爪螨的半致死浓度(LC50)为8.20×105个孢子/mL,1×107个孢子/mL的孢子悬液半致死时间(LT50)为6.13天。(2)渐狭蜡蚧菌TN002菌株液体发酵条件的研究。以产孢量和菌丝干重为检测指标设计单因素和正交试验探究渐狭蜡蚧菌TN002菌株液体培养条件,结果显示,渐狭蜡蚧菌TN002菌株摇瓶培养生产种子液最适培养基为酵母浸粉葡萄糖液体培养基(PJ)。将渐狭蜡蚧菌TN002菌株以1%的接种量(1×108个孢子/mL)接种到含50 mL葡萄糖酵母浸粉液体培养基中培养,孢子浓度和菌丝干重均在60 h达到最大。初始pH为5.5时产孢最多,不同初始pH培养下菌丝干重无显著差异。对装量、接种量、转速设计正交试验,结果显示,三者皆为影响渐狭蜡蚧菌TN002菌株摇瓶培养产孢量的重要因子。摇瓶培养生产一级种子液最佳培养组合即为:装量100 mL/500 mL锥形瓶、接种量4%、转速190 r/min。为筛选罐发酵生产种子液培养基组分设计不同碳源、氮源摇瓶培养,结果显示碳源中蔗糖和白砂糖对生长最好,氮源中黄豆粉和麦麸产孢最好。考虑到经济节约,选用白砂糖代替蔗糖与麦麸组合成为罐发酵生产种子液培养基较为理想。以麦麸、白砂糖和接种量为因素设计正交试验,结果发现,麦麸和白砂糖为重要影响因子,10号处理(5%麦麸+5%白砂糖)培养下产孢量最大。经过方差分析,认为最适培养组合为5%麦麸+5%白砂糖+2%接种量。(3)渐狭蜡蚧菌TN002菌株固态发酵条件的研究。以产孢量和孢子活力为检测指标,罐头瓶为培养容器,25℃的培养温度下,对渐狭蜡蚧菌TN002菌株固态发酵培养条件进行研究。开展了可用于大量商品化生产的固态发酵基质筛选试验,结果显示,麦麸和黄豆粉为主要营养基质时产孢量最大,最终确定30%稻谷壳+35%麦麸+35%黄豆粉为固态发酵培养基。最佳固态发酵培养条件为25℃,培养基质20 g,料水比为1.00:1,种子液接种浓度为1×106个孢子/g干料。5~7天为最适收孢时间。固态发酵后孢子悬液对柑橘全爪螨的毒力与原始菌株毒力相比相对稳定:LC50为7.43×106个孢子/mL,2×107个孢子/mL的孢子悬液LT50为5.06天。