哺乳动物的卵母细胞是一种具有非凡能力的细胞,它不仅能进行减数分裂将单倍体母源性遗传物质传递给子代,而且能够使合子基因组发生重编程,启动并支持早期胚胎的发育过程。越来越多的研究表明,卵母细胞中储存的母源蛋白在受精、染色质重塑、合子基因组激活、胚胎致密化等过程中都发挥着极其重要的作用。因此,鉴定和研究卵母细胞中的母源蛋白对于我们认识哺乳动物早期胚胎的发育过程具有十分重要的意义。在本研究中我们采用更高效更全面的策略对小鼠卵母细胞中的母源蛋白进行研究。我们首先利用1D SDS-PAGE+LC-MS/MS的技术路线构建小鼠MⅡ期卵母细胞蛋白表达谱。从2700枚去透明带的小鼠MⅡ期卵母细胞中,我们成功地鉴定到了625种母源蛋白。这是到目前为止最大的小鼠MⅡ期卵细胞蛋白质列表。我们将构建的卵母细胞蛋白表达谱递交到国际Proteomics identifications database (PRIDE)数据库。点击每一个母源蛋白的链接,就可以查看到详细的鉴定信息,包括肽段和谱图等。该公共数据库的构建为研究母源蛋白与早期胚胎发育提供很有价值的资源。其次,利用生物信息学的技术手段对该蛋白表达谱进行了详细的分析,筛选到一批可能在早期胚胎发育过程中起关键作用的母源蛋白。这些蛋白为进一步寻找在早期胚胎发育过程中起重要作用的母源效应蛋白提供了很好的候选成分。小鼠MⅡ期的卵母细胞处于第二次减数分裂中期,在含有细胞松弛素B的氯化锶激活液的作用下可以发生孤雌激活,进而发育至囊胚。为了寻找在这一过程中发挥重要作用的母源蛋白,我们利用定量蛋白质组学的经典方法2D-PAGE+MALDI-TOF/TOF技术路线构建小鼠MⅡ期卵母细胞孤雌激活前后差异蛋白表达谱。一共鉴定到78个差异蛋白点,对应于52种蛋白。生物信息学分析发现,其中有很多蛋白参与细胞增殖和胚胎发育的过程,有一些蛋白已经被证实参与了染色质的重塑过程。因此,这一蛋白列表为研究卵细胞激活机制以及在早期胚胎发育过程中起重要作用的母源因子提供了很有意义的候选成分。在构建了卵母细胞蛋白表达谱的基础上,我们挑选了一些母源蛋白进行了初步的功能研究。AnnexinⅦ呈极性颗粒状分布于卵母细胞染色体对侧质膜下,和内质网形成的极性颗粒关系密切,可能在受精引发钙离子震荡过程中发挥作用。另外,我们还对ECAT1、OOEP、RBPMS2、TLE6和ZBED3在小鼠卵巢及早期胚胎中的表达和定位进行了探讨。本研究利用互补的策略构建了小鼠MⅡ期卵母细胞蛋白表达谱和差异蛋白谱,获得了对MⅡ期卵母细胞中母源蛋白的全景式认识,为研究母源蛋白的功能以及促进对早期胚胎发育过程的认识奠定了很好的基础。